1 EINLEITUNG

35 Tiere, Material und Methoden
Bezeichnung: Bezugsquelle:
• 5α Androstanolon Antikörper: BioGenes GmbH
Immunglobulin G aus dem Kaninchen gegen
5α Androstan-17α-ol-3-one-CMO-BSA
• Cortisol Antikörper: Bioclin (Art.-Nr.: 1002)
Immunglobulin G aus dem Kaninchen gegen
Cortisol
• 5βAndrostandiol Antikörper: IZW, Berlin
Immunglobulin G aus dem Schaf gegen
5β Androstan-3α,11β-diol-17-CMO-BSA
• 11 – Keto – Tulln Antikörper: Prof. Dr. Möstl, vet. med.
Immunglobulin G aus dem Kaninchen gegen Universität Wien
11-Ketoetiocholanolon-Tulln
• Beschichtungsantikörper:
Immunglobulin G aus dem Schaf gegen den Quartett (Nr. 090790150)
Fc-Teil des Immunglobulin G aus Kaninchen
3.1.7.2 Präparation der Mikrotiterplatten
Für die Quantifizierung wurden zunächst die verwendeten Microtiterplatten (Typ immuno
Maxisorp F96, Firma Nunc) mit Schaf – Immunglobulin G, welches gegen die Fc-Teile von
Kaninchen – Immunglobulin G gerichtet ist, beschichtet. Für diesen Vorgang wurde jedes
well mit 300 µl Beschichtungspuffer (1 µg Schaf – Immunglobulin G + 0,48 mg Na2CO3 +
0,88 mg NaHCO3 in H2O; pH: 9,6) gefüllt. Die Platten wurden daraufhin mit Cellophanfolie
verschlossen und bei 4° C über Nacht inkubiert. Am nächsten Morgen wurde der
Beschichtungspuffer dekantiert, die Platten auf Fliespapier trocken geklopft und anschließend
jedes well mit 300 µl Absättigerlösung (2,42 g Tris + 23,3 g NaCl + 3 g BSA + 0,5 ml Tween
80 ad 1 l H2O; pH:7,5) wieder befüllt. Die Platten wurden wiederum mit Cellophanfolie
verschlossen und bei 4° C über Nacht inkubiert. Nach dieser zweiten Inkubation wurden die
Platten, nach Dekantieren der Absättigerlösung, erneut auf Fliespapier trocken geklopft und
zur anschließenden Lagerung bei – 20° C mit Cellophanfolie verschlossen.