der Medizinischen Fakultät der Ernst-Moritz-Arndt-Univer

Tab.1: Merkmale der verwendeten CK – Antikörper
Zytokeratin AK – Merkmale Verdünnung Klon Firma
CK 13 monoklonal Maus 1 : 60 KS 13.1 Mannheim-
Boehringer
CK 7 monoklonal Maus 1 : 30 OV-TL 12/30 DAKO
CK 8 monoklonal Maus 1 : 30 35ß11 DAKO
CK 19 monoklonal Maus 1 : 60 KS 13.1 DAKO
Zur Darstellung wurde der Färbeautomat Techmate 500 der Firma DAKO
verwendet.
Der Sekundärantikörper zur farblichen Darstellung der durch die Zytokeratinantikörper
markierten Zellstrukturen ist ebenfalls ein Produkt der Firma
DAKO. Die Reaktion basiert auf der indirekten Streptavadin-Biotin-Methode, deren
Grundlage eine Peroxidasereaktion mit einem AEC – Chromogen-Substrat ist. Die
AEC Lösung ist eine stabile Pufferlösung aus Wasserstoffperoxid und 3-Amino-9-
ethylcarbacol (AEC).
Die Präparate wurden auf einem Rotationsmikrotom mit einer Schichtdicke von
3 µm geschnitten, es wurden Objektträger der Firma DAKO verwendet.
Bei den Zytokeratinen 8 und 19 war eine Mikrowellenvorbehandlung notwendig,
wobei die Präparate zweimal 5 Minuten in einem Puffer der Firma DAKO bei 800
Watt erwärmt wurden.
Im Automaten finden im wesentlichen folgende Schritte statt:
1. Enzymatische Vorbehandlung
2. Inkubation mit Primärantikörper 60 Minuten bei
Raumtemperatur
3. Inkubation mit dem Sekundärantikörper für 25 Minuten
4. Blockierung der durch den Sekundärantikörper stattfindende
Peroxidasereaktion
5. Eigentliche farbliche Markierung durch Inkubation mit
Streptavadin/Peroxidase für 25 Minuten
6. Inkubation mit der AEC Substratlösung für 3 mal 5 Minuten
Nach der eigentlichen Zytokeratindarstellung wird im Automaten mit Hämatoxylin
gegengefärbt.
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