Chlamydia pneumoniae - Universität zu Lübeck

Reagenzien und Material:
HEp-2 Zellen American Type Culture Collection (ATCC) Nr. CCL 23
Zellkulturflaschen
Anzuchtmedium
NEAA
6-Loch-Zellkulturplatten
175 cm 2 , Cellstar ® , Cat.No. 660175, Greiner Bio-One
Eagle’s Minimal Essential Medium, Cat.No. E15-024, PAA
Laboratories unter dem Zusatz von FKS Cat.No. S 0115
Biochrom AG und 1% Glutamin (200 mM) Cat.No. M11-
004, PAA Laboratories, sowie Amphotericin B und
Gentamicin (je 25 mg/500 ml)
Non-essential Amino Acids, Cat.No. M11-003, PAA-
Laboratories
Cellstar ® , Cat.No. 657160, Greiner Bio-one
PBS Phosphate Based Saline, 4g NaCl, 0.1g
Kaliumhydrogenphosphat, 0.1g KCl, 0.575g di-
Natriumhydrogenphosphat x 2 H 2 0 ad 500 ml Aqua dest.
Trypsin EDTA
Infektionsmedium
Cat.No. L-11-004, PAA Laboratories
Anzuchtmedium + Cycloheximid 1 µg/ml, Sigma-Aldrich
Taufkirchen
2.1.1 Bestimmung der IFU-Konzentration
Wie bereits in der Einleitung erwähnt, ist für Chlamydien die Mengeneinheit IFU (Inclusion
Forming Unit) gebräuchlich. Die Konzentration der Chlamydienstammlösung wurde
retrospektiv durch Kultivierung und anschließende Auszählung der entstandenen
Einschlüsse bestimmt. Die Anzahl der entstandenen Einschlüsse entsprach demnach der
Anzahl der IFU in der Ausgangslösung.
HEp-2 Zellen wurden in 48-Loch Zellkulturplatten, deren Vertiefungen Deckgläschen
enthielten, zur Ausbildung eines Zellrasens angezüchtet. Aus einem Aliquot der
Chlamydienstammlösung (CV-6-Stamm) wurde wie oben beschrieben durch Behandlung
mit Glasschrot eine EK-Suspension gewonnen und daraus eine Verdünnungsreihe in
Zehnerpotenzen hergestellt. Je 100 µl der unterschiedlich verdünnten Suspensionen
konnte nun auf die angezüchteten Wirtszellen verteilt und über drei Tage kultiviert
werden. Im Anschluß fand die Immunfluoreszenzfärbung der Deckgläser mit einem
vorgefertigten Antikörper-Kit statt. Die absolute Anzahl der entstandenen
Einschlußkörperchen wurde in einem zum Auszählen sinnvollen Zahlenbereich unter dem
Mikroskop durchgeführt. Hierbei empfahl es sich, unter geeigneter Vergrößerung die
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