Chlamydia pneumoniae - Universität zu Lübeck
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Die Inkubation fand für 45 Minuten in der feuchten Kammer und in absoluter Dunkelheit<br />
statt. Nach diesem Schritt konnten die Zellen mittels PBS gewaschen, und nach einer<br />
kurzen Trocknungszeit auf einem Objektträger eingedeckt werden.<br />
Eingesetzte Primär- und Sekundärantikörper:<br />
Antikörper Quelle Verdünnung Hersteller<br />
Anti-Endothelin-A-<br />
Rezeptor<br />
Anti-Endothelin-B-<br />
Rezeptor<br />
Anti-Kaninchen IgG,<br />
FITC-konjugiert<br />
Kaninchen 1:1000 Cat.No. E 3651<br />
Sigma-Aldrich<br />
Kaninchen 1:1000 Cat.No. ab 1921<br />
Abcam<br />
Ziege 1:300 Cat.No. F 9887<br />
Sigma-Aldrich<br />
Reagenzien und Material:<br />
1% Paraformaldehyd Paraformaldehyde, Sigma-Aldrich, Cat.No.<br />
P 6148, verdünnt in PBS<br />
10% Rinderalbumin Albumin, bovine Fraction V, Cat.No. A<br />
7906, Sigma-Aldrich<br />
48-Loch Zellkulturplatten<br />
Cat.No. 150687, Nunc Products<br />
2.10 Proliferationsversuche mit HCAEC<br />
Dieser Versuch wurde gewählt, um die Effekte eines durch <strong>Chlamydia</strong> <strong>pneumoniae</strong><br />
stimulierten Endothelin-1 Systems in einem größeren Zusammenhang <strong>zu</strong> betrachten. In<br />
einem Dreifachansatz in 12-Loch-Zellkulturplatten wurden <strong>zu</strong>nächst je Probe und<br />
Vertiefung 40000 koronararterielle Endothelzellen (HCAEC) überbracht und für 24h in<br />
DMEM-Medium, versetzt mit 2% FBS bei 37°C und 5% CO 2 im Brutschrank inkubiert.<br />
Dieses Medium wurde auch für alle weiteren Abschnitte des Experiments verwendet. Am<br />
nächsten Tag erhielten alle sechs Proben neues Medium. Der Versuchsablauf gestaltete<br />
sich wie folgt:<br />
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