Chlamydia pneumoniae - Universität zu Lübeck

verwenden. Hierzu wurde das Pellet nicht wie oben beschrieben in CASMC–Medium,
sondern in einer 10%-igen DMSO-Lösung suspendiert. Die Zellen konnten nun in
spezielle Gefäße gefüllt und für 24 Stunden bei –70°C und anschließend in flüssigem
Stickstoff eingefroren werden. Erfahrungsgemäß war auch nach mehreren Monaten eine
annährend verlustfreie Wiederanzucht möglich.
Reagenzien und Material:
CASMC
Coronary Artery Smooth Muscle Cells,
Cat.No. CC-2583, Clonetics, CellSystems
Biotechnologie Vertrieb GmbH
CASMC-Medium Smooth Muscle Cell Basal Medium 2,
Cat.No. C-22262, Promocell, sowie Zusätze
des Smooth Muscle Cell Growth Medium 2
Kit, Cat.No. C-39262, Promocell, ohne
Zugabe von Antibiotika
Zellkulturflaschen 175 cm 2 , Cellstar ® , Cat.No. 660175,
Greiner Bio-One
Gelatine 0.5%
Gelatine from bovine skin Typ B, Sigma-
Aldrich verdünnt mit PBS
Accutase ® Accutase ® Cat.No. L11-007, PAA
Laboratories
DMSO 10%
Dimethylsulfoxid UVASOL ® , Merck, gelöst
in CASMC – Medium, steril filtriert
2.3 Anzucht von venösen und koronararteriellen Endothelzellen
Die Vorversuche an Endothelzellen wurden zunächst mit venösen Endothelzellen (Human
Umbilical Venous Endothelial Cells, HUVEC) durchgeführt. Die Isolation der HUVEC
erfolgte aus einer frischen menschlichen Nabelschnur durch die Medizinisch-Technische-
Laborassistentin Tanja Lüdemann im Institut selbst. Die Anzucht geschah analog des
CASMC-Protokolls. Als Nährlösung wurde ein spezielles Kulturmedium verwendet.
Nachdem die Vorversuche an HUVEC beendet waren, machte es die Fragestellung
erforderlich, die wesentlichen Experimente an koronararteriellen Endothelzellen (Human
Coronary Artery Endothelial Cells, HCAEC) zu etablieren. Die einer menschlichen Zellinie
entstammenden Endothelzellen wurden, in Trockeneis verpackt, postalisch zugesandt.
Eine Charge enthielt laut Hersteller mehr als 500000 Zellen, wobei 15 Zellpassagen zur
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