Rekombinante Expression des IL-4-induzierenden Schistosomen-Ei ...

Ergebnisse
4.3.6 HEK-IPSE führt nicht zu einer Quervernetzung von Immunglobulinen
Nach Metzger (1992) werden bei einer Allergie Basophile durch eine Quervernetzung des
rezeptorgebundenen allergenspezifischen IgEs über das Allergen aktiviert. Quervernetzungen können
über Bindung großer Komplexe im Äquivalenzbereich im Doppelimmunodiffusionsassay nach
Ouchterlony nachgewiesen werden. Für E. coli-IPSE sind diese Versuche jedoch immer negativ
ausgefallen. Das bedeutet, dass IPSE IgE und IgG zwar bindet, jedoch nicht quervernetzt
(Blindow 2004). E. coli-IPSE ist jedoch schlecht löslich und bildet im Ouchterlony im Auftragsloch
Präzipitate, so dass die tatsächlich ins Gel diffundierte Proteinmenge erheblich niedriger ist als die
aufgetragene. Möglicherweise können über dieses Material keine so hohen Proteinkonzentrationen im
Gel erreicht werden, die mit den Immunglobulinen Präzipitate bilden könnten.
Aus diesem Grund wurden die Versuche mit dem gut löslichen HEK-IPSE wiederholt. Die Ergebnisse
sind in Abbildung 4.32 dargestellt. Wie in der Kontrolle mit dem anti-IPSE-Antikörper zu sehen ist,
bildet HEK-IPSE keine Präzipitate direkt im Auftragsloch wie es bei E. coli-IPSE der Fall ist. Auch
die Präzipitatslinien sind bei diesem Material sehr viel deutlicher ausgeprägt. Das heißt, dass mehr
HEK-IPSE in das Gel diffundieren konnte.
Jedoch sind auch bei HEK-IPSE weder mit IgG noch mit IgE Präzipitatbanden zu erkennen. Die
Versuche sind über einen weiten Konzentrationsbereich durchgeführt worden. In Abbildung 4.32
dargestellt sind die Ergebnisse der Diffusion der Immunglobuline und HEK-IPSE in äquimolarer
Menge und in zehnfachem Immunglobulin-Überschuss. Werden HEK-IPSE und Immunglobulin in
äquimolarer Menge aufgetragen, so wird das Gel vollständig entfärbt. Es zeigen sich keine
Präzipitatlinien. Das bedeutet, dass es zu keiner Quervernetzung kommt. Wenn die Immunglobuline in
zehnfachem Überschuss zugegeben werden, zeigen sich um die Auftragslöcher des Immunglobulins
konzentrische Proteinfärbungen. Diese sind jedoch nicht auf eine Quervernetzung mit HEK-IPSE
zurückzuführen, da diese Präzipitate auch auftreten, wenn statt HEK-IPSE nur Puffer in die Löcher
aufgetragen wird. Diese unspezifische Anfärbung ist auf Aggregatbildung der Immunglobuline bei
hohen Proteinkonzentrationen zurückzuführen.
Somit ist selbst mit dem gut löslichen HEK-IPSE im Ouchterlony keine Quervernetzung zwischen
Immunglobulinen und IPSE nachweisbar.
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