Rekombinante Expression des IL-4-induzierenden Schistosomen-Ei ...

Diskussion
Erkenntnissen inaktiv ist, ist ein Teil des eingesetzten Materials somit nicht aktiv. Dennoch erklärt
dies nicht den relativ großen Aktivitätsunterschied. Unter Umständen weist das High Five-IPSE in
einigen Bereichen nicht die richtige Faltung auf oder durch die Glycosylierung ist die Bindungsstelle
für Immunglobuline sterisch nicht zugänglich.
In Zytospinpräparaten konnte gezeigt werden, dass es durch Stimulation mit HEK-IPSE, High Five-
IPSE und E. coli-IPSE nicht nur zur IL-4-Freisetzung kommt, sondern die Basophilen dabei in
gleicher Weise degranulieren wie nach Stimulation mit SmEA, das natürliches IPSE enthält. Die
Degranulation und damit die Histamin-Freisetzung ist ein Vorgang der normalerweise nach 30 bis
45 Minuten abgeschlossen ist (Kagey-Sobotka et al. 1981). Auch in der vorliegenden Arbeit konnte
bereits nach 45 Minuten eine Degranulation in den stimulierten Ansätzen beobachtet werden. Da die
Granula sich in frisch präparierten Basophilen häufig nur schlecht anfärben lassen, wurden auch
längere Stimulationszeiten eingesetzt, um den Unterschied zwischen granulierten und degranulierten
Zellen deutlicher hervorzuheben.
Auch die IgE-Abhängigkeit der Basophilenaktivierung durch IPSE konnte für HEK-IPSE in
Strippingexperimenten bestätigt werden. Dabei konnte erstmals über FACS-Experimente mit
gestrippten und nativen Basophilen gezeigt werden, dass IPSE tatsächlich an die Oberfläche der
Basophilen bindet. Die Bindung des biotinylierten HEK-IPSEs bzw. des biotinylierten anti-IgEs
wurde über PE-konjugiertes Streptavidin nachgewiesen. Anhand der Fluoreszenz ist der Unterschied
der Bindung von HEK-IPSE zwischen gestrippten und nativen Basophilen zwar nicht so ausgeprägt
wie bei der Positivkontrolle mit anti-IgE. Dies kann jedoch entweder auf ein unterschiedliches
Ausmaß an Biotinylierung oder auf unterschiedliche Affinitäten von HEK-IPSE und anti-IgE
zurückzuführen sein.
Ebenfalls in FACS-Experimenten konnte gezeigt werden, dass sowohl durch anti-IgE wie auch HEK-
IPSE der Aktivierungsmarker CD203c für Basophile hochreguliert wird. CD203c ist die
Ektonukleotid-Pyrophosphatase/Phosphodiesterase 3 (E-NPP 3), die in Basophilen sowohl
intrazellulär wie auch an der Oberfläche lokalisiert ist (Bühring et al. 2003). Bei Aktivierung der
Basophilen durch Quervernetzung des membranständigen IgEs durch anti-IgE oder Allergene wird die
Menge an membranständigem CD203c von den Zellen hochreguliert (Hauswirth et al. 2002). Die
Hochregulierung korreliert dabei mit der Mediatorfreisetzung. Verglichen mit CD63, einem weiteren
häufig eingesetzten Aktivierungsmarker für Basophile, zeichnet sich CD203c durch eine deutlich
höhere Sensitivität aus (Boumiza et al. 2003). Mit HEK-IPSE wurde die Hochregulierung von
CD203c erstmals für IPSE nachgewiesen. Es ist aber davon auszugehen, dass auch natürliches IPSE
und die weiteren rekombinanten IPSEs die gleiche Eigenschaft zeigen, da auf den Basophilen alle
IPSE-Proteine zu einer Mediatorfreisetzung führen. Um ausschließen zu können, dass die Fixierung
der Basophilen Einfluss auf die Bindung des PE-konjugierten anti-CD203c-Antikörpers hat, wurde ein
Teil der nativen Basophilen, die mit HEK-IPSE inkubiert worden sind, anschließend fixiert und im
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