Rekombinante Expression des IL-4-induzierenden Schistosomen-Ei ...
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Methoden<br />
mit HEK-Medium mit 100 µg/ml Zeocin versetzt. Stabil transfizierte 293 HEK-Zellen werden<br />
kontinuierlich bei 100 µg/ml Zeocin gehalten und wie unter 3.4.1 beschrieben alle 3 bis 4 Tage im<br />
Verhältnis 1:5 geteilt.<br />
3.4.3 <strong>Expression</strong> von rekombinantem IPSE in 293 HEK-Zellen<br />
Da der Vektor pMSII-IPSE einen Igκ-Leader am N-Terminus besitzt, wird das rekombinante Protein<br />
fortlaufend von den Zellen ins Medium sekretiert. Zur Bestimmung <strong>des</strong> optimalen Zeitpunktes zum<br />
Ernten <strong>des</strong> Kulturüberstan<strong>des</strong> mit einer möglichst hohen HEK-IPSE-Konzentration wurde eine<br />
<strong>Expression</strong>szeitkinetik durchgeführt.<br />
Um die optimale <strong>Expression</strong>sdauer mit einer möglichst hohen IPSE-Konzentration zu ermitteln, wurde<br />
einer Kultur mehrmals im Laufe von 14 Tagen eine 100 µl-Probe entnommen. Die erhaltenen Proben<br />
wurden zur Ermittlung einer Zeitkinetik im Basophilenstimulationsassay (siehe 3.9.2) eingesetzt. Die<br />
Menge der <strong>IL</strong>-4-Freisetzung ist dabei ein Maß für die in der Probe enthaltene IPSE-Konzentration.<br />
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