Rekombinante Expression des IL-4-induzierenden Schistosomen-Ei ...

Methoden
Elektrophoresekammer der Firma Phase bei zunächst bei 50 V bis die Lauffront das Trenngel erreicht
hat, dann wird die Spannung auf 100 bis 120 V erhöht. Die Elektrophorese wird beendet, wenn die
Lauffront das Gelende erreicht hat.
4x Sammelgelpuffer (pH 6,8) 4x Trenngelpuffer (pH 8,8)
0,5 M Tris-HCl 1,5 M Tris-HCl
2x Probenpuffer (pH 6,8; nicht-reduzierend) Elektrodenpuffer
0,12 M Tris-HCl 50 mM Tris-HCl
20 % (v/v) Glycerin 384 mM Glycin
4 % (w/v) SDS 0,1 % (w/v) SDS
0,01 % (w/v) Bromphenolblau
2x Probenpuffer (pH 6,8; reduzierend)
Für den reduzierenden Probenpuffer wird dem nicht-reduzierendem Probenpuffer 1 % (w/v) DTT
zugesetzt.
Tabelle 3.1: Zusammensetzung von Sammelgel und Trenngel für die SDS-PAGE
Sammelgel
Trenngel
T = 4 % T = 7,5 % T = 12 % T = 15 %
Aqua dest. 2,9 ml 8 ml 5,5 ml 3,9 ml
Acrylamid 850 µl 4 ml 6,5 ml 8,1 ml
4x Sammelgelpuffer 1,3 ml -
4x Trenngelpuffer - 4 ml
Pyronin G 16 µl -
SDS (10 % (w/v) 51 µl 163 µl
TEMED 5 µl 16 µl
APS (10 % (w/v) 30 µl 100 µl
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