Diagnostik des variablen Immundefektsyndroms (CVID) - Karger
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Messung«KleinerLympozytenstatus» (Abb.2)<br />
Das Messdokument enthä lt ein zweidimensionales Aufnahmefenster mit den<br />
Achsen FL3 (CD45) und Seitwä rtsstreulicht (side scatter; SSC). Eine AnalyseregionR1definiert<br />
dieLymphozytenpopulation ü berdieExpression vonCD45 und<br />
niedrigesStreulicht.Als weitereFensterwerdendieLymphozyteninFL1vs. FL4<br />
undFL2vs. FL4dargestellt. 5000Lymphozytensolltenmin<strong>des</strong>tens aufgenommen<br />
werden.<br />
MessungzurKlassifikation von<strong>CVID</strong> (Abb.3)<br />
Das Messdokument enthä lt ein zweidimensionales Akquisitionsfenster mit<br />
den Achsen Vorwä rts- (forward scatter; FSC) und SSC. Eine Analyseregion R1<br />
definiert dieLymphozytenpopulation ü berdasStreulicht.Ein weiteresFenstermit<br />
den Achsen FL3 und FL4 enthä lt eine Region R2, die alle CD19þ B-Zellen einschließt.<br />
Alternativ kann hier auch eine Histogrammdarstellung gewä hlt werden.<br />
DieRegionenR1undR2werdenzum Aufnahme-«Gate»«B-Zellen» zusammengefasst.<br />
Ein drittes Fenster stellt FL1 gegen FL2 dar und wird auf die Darstellung<br />
der B-Zellen begrenzt (Gating). Die zu speichernden Ereignisse werden auf 5000<br />
im «Gate» «B-Zellen» und zusä tzlich auf eine Zeitbegrenzung von 5min (fü r<br />
500 m lProbenvolumen) gesetzt. Esempfiehltsich,alleZellenoderwenigstens alle<br />
Lymphozyten zuspeichern, um spä ter die Spezifitä tunerwarteter Ergebnisse an<br />
anderenZellenüberprüfenzukö nnen.<br />
MessungzurBestimmungvonICOS-undCD40L-Expressionaufaktivierten<br />
TZellen(Abb.4)<br />
Die Zellen werden zunä chst ineinem zweidimensionalem Aufnahmefenster,<br />
das bewusst größere Zellen einschließt, ü ber FSC und SSC und ein zusä tzliches<br />
«Gate» auf CD4þ Zellen definiert (cave nach Stimulation ü ber CD3 ist CD3 nur<br />
noch schwach auf der Oberflä che nachweisbar). Zum Nachweis der Aktivierung<br />
werden ineinem zweiten Fenster die CD4þ Zellen (Gate1) entsprechend ihrer<br />
Expression von CD69 (X-Achse) und CD40L bzw. ICOS (Y-Achse) dargestellt.<br />
Min<strong>des</strong>tens 5000CD4 þ Zellensolltenaufgenommenwerden.<br />
Datenanalyse<br />
Indikationen<br />
PeriphereLymphozytenpopulationen<br />
Fü rdie Auswertung <strong>des</strong> kleinen Lymphozytenstatus wird entsprechend der<br />
Abbildung2amitdenAchsenFL3(CD45)undSSC dasLymphozytenfenster(R1)<br />
gesetzt. DerAnteil anCD4-undCD8-T-Zellen(UR,Abb.2bbzw.2c),NK-Zellen<br />
(UL, Abb.2d) und B-Zellen (UL, Abb.2e) wird durch die jeweiligen Quadranten<br />
ermittelt.DieAbsolutwertewerdendurchMultiplikation derGesamtlymphozyten-<br />
730 Warnatz/Schlesier
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