Diagnostik des variablen Immundefektsyndroms (CVID) - Karger
Diagnostik des variablen Immundefektsyndroms (CVID) - Karger
Diagnostik des variablen Immundefektsyndroms (CVID) - Karger
Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.
YUMPU macht aus Druck-PDFs automatisch weboptimierte ePaper, die Google liebt.
Protokoll<br />
Prinzip<br />
Vierfarbdurchflusszytometrie: Die beschriebenen Färbungensind reine Oberflä<br />
chenfärbungen. Alle Protokolle sind auf Analysen am FACSCalibur (BD Biosciences,<br />
Heidelberg, Deutschland) mit 488-nm-Laser und 635-nm-Dioden-Laser<br />
sowie mit CellQuest-Software (BD Biosciences) ausgelegt. Entsprechende Adaptationen<br />
an andere Zytometer mü ssen gegebenenfalls vorgenommen werden. Die<br />
Grundlagen der Bedienung, Gerä teeinstellungen, Kompensierungen, zweidimensionalen<br />
Punktwolken-Analysen (Dot-Plot) und das Setzenvon Auswertefenstern<br />
(Regions,Gates) werdenals bekanntvorausgesetzt.<br />
Fü rdie Fä rbungen werden periphere mononukleäre Blutzellen (peripheral<br />
blood mononuclear cells; PBMNCs) verwendet, die durch Ficoll-Dichtegradientenzentrifugation<br />
aus EDTA-Blutgewonnenwerden. VollblutfärbungenderB-ZellenmitgewaschenemBlutwerdeninderLiteraturbeschrieben[18],sindaberwegen<br />
der Verwendung von Anti-Immunglobulin-Antikö rpern problematisch, da<br />
Reste von Serumimmunglobulin die Fä rbungen stören. Einzelne Fä rbungen sind<br />
nurnachentsprechenderIn-vitro-Aktivierungmöglich.<br />
KleinerLymphozytenstatus<br />
Indikationen<br />
In einer Vollblutfärbung werden die jeweiligen Anteile der CD4-,<br />
CD8-T-Zellen, B-Zellen und NK-Zellen bestimmt (Tab.3). Durch gleichzeitige<br />
Bestimmung <strong>des</strong> Differentialblutbilds werden zusä tzlich die Absolutwerte ermittelt.<br />
Ausschlussvon Differentialdiagnosen<br />
Grundsä tzlich ist zu bemerken, dass durch die beschriebenen FACS-Untersuchungennur<br />
quantitativeDefekte, aberkeinefunktionellensowieminimalstrukturellen<br />
Verä nderungenerfasst werden. WeiterefunktionelleUntersuchungensind<br />
bei entsprechender Indikation in Speziallabors mö glich. Zum Ausschluss <strong>des</strong> Hyper-IgM-Syndroms<br />
bei CD40-Defekt (ehemalig Typ 3) wird CD40 auf B-Zellen<br />
gefärbt. Sowohl CD40L- als auch ICOS-Defekte lassen sich nur auf aktivierten<br />
T-Zellennachweisen. WährenddieICOS-Induktion nachStimulation in PBMNCs<br />
untersucht werdenkann,empfiehltessichzum Nachweis derOberflä chenexpression<br />
vonCD40L, CD4 þ TZellenvorheraufzureinigen.<br />
Klassifikation <strong>des</strong><strong>CVID</strong><br />
ImJahr 2002 beschriebenwir dieersteKlassifikation <strong>des</strong><strong>CVID</strong> aufderBasis<br />
durchflusszytometrischer Untersuchungen (Freiburg-Klassifikation [14]). Seitdem<br />
724 Warnatz/Schlesier