Diagnostik des variablen Immundefektsyndroms (CVID) - Karger

Tab.3. Antikörpermischungen fü rkleines Lymphozyten-Panel a
FITC 100 m l PE 100 m l PerCP 50 m l APC 25 m l
K1 CD8 CD4 CD45 CD3
K2 CD19 CD56/16 b CD45 CD3
a Je 15 m lder Antikörpermischung fü rdie Fä rbung von 50 m lVollblut.
b Je 1:2,5 vorverdü nnt.
Tab.4. Antikörpermischungen fü rFreiburg-Klassifikation a
FITC 100 m l PE 100 m l PC7 25 m l FL4 25 m l
B1 CD27 (1 :5) Anti-IgD (1 :40) CD19 Anti-IgM-Cy5 (1 :40)
B2 CD38 CD21 CD19 Anti-IgM-Cy5 (1 :40)
B3 Anti-Kappa (1 :2) Anti-Lambda (1 :2) CD19 Anti-IgM-Cy5 (1 :40)
B4 CD40 ?? CD19 Anti-IgM-Cy5 (1 :40) b
a Je 10 m lder Antikörpermischung fü rdie Fä rbung von 5 10 5 PBNC ¼ 50 m lZellsuspen-
sion.
b Nur bei Verdacht auf Hyper IgM.
Tab.5. Antikörper-Panel zur Bestimmung von Aktivierung von T-Zellen a
FITC PE PerCP APC
A1 CD69 Isotyp G1 CD3 CD4
A2 CD69 ICOS CD3 CD4
A3 CD69 CD40L (CD154) CD3 CD4
a Eswerden je5m lder jeweiligen Antikörper auf 0,5–1,0 10 6 Zellen gegeben.
Indikationen
BestimmungvonCD40L-undICOS-ExpressionaufaktiviertenTZellen/
AktivierungvonT-Zellen
Zur Bestimmung der ICOS-Expression werden 1 10 6 Ficoll-isolierte
PBMNCs in24-Loch-Platten inRPMI 1640/10%FCS aufgenommen und fü r
16– 20 hbei 37 C/5%CO2 mit bzw. ohne 1 m g/ml PHA inkubiert. Die Zellen
werden anschließend in ein FACS-Rö hrchen überfü hrt, einmal inFACS-Medium
gewaschen (5min, 300 g )und mit der Antikö rpermischung entsprechend des
Protokollsfü rPBMNCsgefärbt. Zum Nachweis derAktivierungwerdendieT-Zellenzusä
tzlichmit CD69 gefärbt(Tab.5, A1 þ A2).
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