Diagnostik des variablen Immundefektsyndroms (CVID) - Karger

Paris-Klassifikation
Die Einteilung der CVID-Patienten nach dem Pariser Schema [15] beruht
auf einer Färbung, die der Färbung B1der Freiburger Klassifikation entspricht.
Hierbei werden die Gruppen MB2 mit normalen Gedächtnis-B-Zellen, MB1 mit
erniedrigten klassengewechselten und normalen IgM-Gedächtnis-B-Zellen und
MB0 mit einer Reduktion beiderGedächtnis-B-Zell-Populationen unterschieden.
Als erniedrigt gelten Werte die 2Standardabweichungenunterhalb derNorm liegen.
In der untersuchten Kohorte lagen die Werte bei < 11% CD27þ B-Zellen
fü rdie Gruppe MB0 und < 8%klassengewechselte B-Zellen fü rdie Gruppe
MB1.
Material
Probenmaterial
8ml EDTA-antikoaguliertes Blut (nicht ä lter als 24h), bei Bestimmung von
ICOS undCD40LnachAktivierungzusä tzlich8ml.
Reagenzien
– Ficoll-Trennlö sung(1,077g/ml; Biochrom,Berlin,Deutschland)
– RPMI 1640(Biochrom)
– FCS(PANBiotech,Aidenbach,Deutschland)
– FACSFlow 1 (BD Biosciences)
– OptilyseB(Beckman-Coulter,Krefeld, Deutschland)
– IntraPrep(Beckman-Coulter)
– EntionisiertesWasser.
Gerä te
– FACSCalibur mit488-nm-Laserund635-nm-Dioden-Laser
– Standardpipetten
– Zentrifuge
– Zählkammer
– Vortex
– 50-ml-Falcon-Polypropylen-Rö hrchenmit Deckel(BD Biosciences)
– 15-ml-Falcon-Polypropylen-Rö hrchenmit Deckel(BD Biosciences)
– 12 75-mm-Falcon-Polystyrolrö hrchen(BD Biosciences)
– 0,5-ml-Probenrö hrchen mit Deckel (Biozym, Hessisch Oldendorf,
Deutschland).
Antikö rper
DieverwendetenAntikö rpersindin Tabelle2aufgelistet.
Indikationen
726 Warnatz/Schlesier