Diagnostik des variablen Immundefektsyndroms (CVID) - Karger

Indikationen
Tab.2. Liste der verwendeten Antikörper a
Antikörper Klon Fluorochrom Bestellnummer Lieferant
CD3 SK7 APC 345767 BD
CD4 13B8,2 FITC IM0448 BC
CD8 B9,11 PE IM0452 BC
CD16 3G8 PE IM1238 BC
CD19 J4,119 FITC IM1284 BC
CD19 J4,119 PC7 IM3628 BC
CD21 B-ly4 PE 555422 BD
CD27 M-T271 FITC F7178 Dako
CD38 HIT2 FITC 555459 BD
CD40 5C3 FITC 555588 BD
CD40-L TRAP1 PE 555700 BD
CD45 2D1 PerCP 345809 BD
CD56 NKH-1 PE IM2073 BC
CD69 FN50 FITC 555530 BD
Anti ICOS ISA-3 PE 12–9948–71 e-bioscience
Anti-IgM Ziege F(ab) 2 Cy5 109–176–129 JIR
Anti-IgD Ziege F(ab) 2 PE 2032–09 SB
Anti-kappa G20–193 FITC 555791 BD
Anti-lambda JDC-12 PE 555797 BD
Isotypkontrolle Maus-IgG1 PE IM0670 BC
BD ¼ BD Biosciences (Heidelberg, Deutschland); BC ¼ Beckman-Coulter (Krefeld, Deutschland);
Dako ¼ DakoCytomation (Hamburg, Deutschland); SB ¼ SouthernBiotech (Biozol,
Eching, Deutschland); JIR ¼ Jackson ImmunoResearch Laboratories (Dianova, Hamburg,
Deutschland), e-bioscience ¼ Biocarta (Hamburg, Deutschland).
a Die hier angegebenen Antikörper werden von den Autoren benutzt. Andere Produkte sind
sicherlich alternativ verwendbar, müssen allerdings vorher selbst getestet werden.
Arbeitsschritte
Vollblutfärbung«KleinerLymphozytenstatus»
DieProtokollezurVollblutfärbungsindunter«CharakterisierungderB-Lymphozyten»
(sieheS.294)beschrieben. DieAntikö rper-Panels sindin Tabelle3dargestellt.
FärbungvonPBMNCs(Klassifikation,CD40-Expression)
Die Fä rbungen zum Ausschluss eines CD40-Defekts, monoklonaler Populationen
und zur Klassifikation finden an PBMNCs nach Aufreinigung ü ber Ficoll-
Dichtegradientenstatt.DietechnischeDurchfü hrungderFärbungenvon PBMNCs,
diemittels Ficollisoliert wurden,wurde bereitsin«CharakterisierungderB-Lymphozyten»;«Arbeitschritte»(sieheS.298)beschriebenDieAntikö
rpermischungen
derFreiburg-Klassifikation sindin Tabelle4zusammengefasst.
Diagnostik desvariablenImmundefektsyndroms (CVID) 727