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PBS(-)で 適 宜 希 釈 し, 室 温 で 20 分 間 免 疫 染 色 を 行 った。PBS(-)で 数 回 洗 浄 後 ,DAPI で 核 酸 の 染 色 を 行 い, 充 分乾 燥 させた 後 に, 蛍 光 退 色 防 止 剤 とともにカバーグラスで 封 入 した。 作 成 したスライドグラスについて 蛍 光顕 微 鏡 により 観 察 を 行 った。程 の 磁 気 力 による 影 響 を 本 実 験 条 件 では 及 ぼしていないと 考 えられる。 従 って, 本 実 験 条 件 で, 定 常強 磁 場 の 生 体 影 響 を 議 論 する 上 で, 磁 場 による 配 向の 影 響 は 考 慮 しなくてよいと 考 えられた。3. 実 験 結 果 と 考 察CHO-K1 細 胞 および xrs5 細 胞 の 強 磁 場 曝 露 後 のコロニー 形 成 率 の 結 果 を Fig. 1 に 示 す。CHO-K1 細 胞 および xrs5 細 胞 のコロニー 形 成 率 に 統 計 的 に 有 意 な 差 は 見られなかった。このことから, 磁 束 密 度 13T の 強 磁 場は DNA 修 復 系 欠 損 の 有 無 に 関 わらず,コロニー 形 成率 に 影 響 を 及 ぼさないことがわかった。この 結 果 は,本 研 究 の 曝 露 条 件 では, 強 磁 場 への 曝 露 が 致 死 効 果 を示 さず,Ku86 欠 損 による DNA2 重 鎖 切 断 の 増 加 へも影 響 しない 可 能 性 を 示 唆 する。Ratio of cloning efficiency(SMF/control)1.510.50CHO‐K1xrs5Fig. 1 Effect of SMF (13T) on cloning efficiency inCHO-K1 and xrs5 cells.次 に, 両 細 胞 株 についてアクチン 繊 維 の 観 察 を 行 った。 既 往 研 究 において, 強 定 常 磁 場 の 作 用 により, 生体 高 分 子 重 合 体 のフィブリンやコラーゲンが 配 向 することが 知 られている。また, 平 滑 筋 細 胞 やコラーゲンに 包 埋 されたグリア 芽 腫 細 胞 が 定 常 磁 場 に 数 日 間 曝 露することにより, 配 向 するとの 報 告 がなされている 3),4) 。このような 磁 気 力 による 影 響 が, 本 研 究 の 曝 露 条件 において 起 き 得 るか,また 変 異 原 性 を 指 標 とした 場合 に 何 らかの 影 響 を 与 えるかどうかを 確 認 するため,本 実 験 条 件 下 において 曝 露 した 細 胞 の 配 向 を, 定 常 磁場 曝 露 後 の 細 胞 のアクチン 繊 維 を 蛍 光 染 色 して 観 察 した(Fig. 2)。この 結 果 , 本 曝 露 条 件 では,どちらの細 胞 についても 細 胞 およびアクチン 繊 維 の 配 向 は確 認 されなかった。 細 胞 の 配 向 が 観 察 された 報 告 では, 本 研 究 の 条 件 よりも 長 時 間 の 曝 露 を 行 っていること, 細 胞 の 種 類 が 異 なること, 磁 場 中 で 配 向 させたコラーゲンを 基 質 としていたことなどから, 本 実験 条 件 では 配 向 が 観 察 されなかったと 考 えられる。この 結 果 から, 磁 場 は, 細 胞 増 殖 の 過 程 でアクチン繊 維 等 の 細 胞 構 成 物 の 配 向 現 象 として 観 察 できるDirection of magnetic fieldFig. 2 Effect of SMF (13T) on actine filaments.Red: Alexa546-labelled-phalloidin. Blue: DAPI.(a) CHO-K1, control, (b) CHO-K1, SMF exposure,(c) xrs5, control and (d) xrs5, SMF exposure.4. まとめチャイニーズハムスターの 卵 巣 由 来 の CHO-K1 細 胞およびその DNA 修 復 系 欠 損 株 xrs5(Ku86 欠 損 ) 細 胞を 用 いて,13T 強 定 常 磁 場 のコロニー 形 成 率 への 影 響を 調 べた 結 果 ,DNA 修 復 能 力 の 違 いにかかわらずコロニー 形 成 率 には 強 磁 場 の 影 響 は 認 められなかった。また, 細 胞 およびアクチン 繊 維 について, 本 実 験 条 件 では, 配 向 が 観 察 されなかった。参 考 文 献1) Puck, T. T. et al., Genetics of somatic mammalian cells,III. Long –term cultivation of euplod cells from human andanimal subjects J. Exp. Med., 108: 945-956 (1958)2) Jeggo, P. A., and Kemp, L.M., X-ray-sensitive mutantsof Chinese hamster ovary cell line isolation and cross-sensitivityto other DNA-damaging agents, Mutat. Res., 112: 313-327(1983)3) Iwasaka, M. et al., Detection of intercellular macromoleculebehavior under strong magnetic fields by linearly polarizedlight, Bioelectromagnetics, 24: 564-570 (2003)4) Hirose, H. et al, Orientation of human glioblastoma cellsembedded in type I collagen, caused by exposed to a 10Tstatic magnetic field, Neurosci. Lett., 338: 88-90 (2003)- 86 -