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Special: Zellbiologie / Zellanalytik
Special: Zellbiologie /
Zytometrie
„Wir sollten uns
besser vernetzen“
Laborjournal hat sich umgehört
bei Leuten, die täglich mit
Zytometrie und Zellsortierung
zu tun haben. Wir wollten
wissen, worauf es ankommt
und was die Community derzeit
bewegt. Hier haben wir
Infos aus den Rückmeldungen
zusammengetragen.
„Früher hatte man nur die Unterscheidung
von ein paar Untergruppen von Immunzellen“,
erinnert sich Elmar Endl an die
Anfänge der Durchflusszytometrie, „heute
kann man durch Kombination von Farbstoffen
immer mehr Untergruppen an Immunzellen
definieren.“ Es hat sich einiges
getan in der Durchflusszytometrie. Grundlage
für die Unterscheidung der Zellen sei
aber noch immer die Fluoreszenz, zumindest
bei den allermeisten Verfahren, die
heute verbreitet sind.
Stolperfalle „Tote Zellen“
Endl leitet eine Arbeitsgruppe am
Institut für molekulare Medizin der Uniklinik
Bonn und war zwischen 2010 und
38
2012 Präsident der Deutschen Gesellschaft
für Zytometrie (DGfZ). „Ich bin seit über
20 Jahren in dem Feld tätig“, erzählt er.
Klassischerweise seien es Antikörper, mit
denen man die Oberfläche von Zellen markiert,
„da gibt es mittlerweile mehr als 300
CD-Marker“, weiß Endl. „Die ganzen fluoreszierenden
Proteine haben noch mal einen
neuen Schwung gebracht“, blickt er auf
die 1990er Jahre zurück. Denn dadurch,
dass man fluoreszierende Marker im Genom
kodiert und gezielt an bestimmte Proteine
koppelt, kann man Genaktivität sichtbar
machen und ausgewählten Zelltypen
ein charakteristisches Leuchten mitgeben,
ohne vor der Messung mit Antikörpern arbeiten
zu müssen.
Doch wie die Rückmeldungen aus den
Laboren zeigen (siehe Seite 39, „Viele Farben,
viele Fehler“), ist die kunterbunte Welt
der Zytometrie nicht immer ein Segen. Es
lauern Artefakte und Fehler bei der Auswertung.
Endl rät dazu, sich im Vorfeld
genau zu überlegen, welche Farben man
einsetzt. Das beginnt damit, dass sich bei
einer Mehrfachfärbung die emittierten
Wellenlängen möglichst wenig überlappen
sollten. „Mit drei Farben ist das noch
nicht problematisch, die kann ich so wählen,
dass ich kein Problem mit dem Overlap
bekomme.“ Anspruchsvoller wird es, wenn
man mehr als vier Farben einsetzen will.
„Bei Farbstoffen, die schwierig zu kombinieren
sind, sollte ich darauf achten,
dass diese nicht zusammen auf derselben
Zellpopulation vorkommen können“, rät
er. Außerdem geht es nicht allein um die
Wellenlänge, sondern es gilt auch, die Intensität
eines Fluorophors zu beachten. Ein
schwach exprimiertes Genprodukt muss
hell genug leuchten, um noch detektiert
zu werden. Umgekehrt wäre es wenig sinnvoll,
ein Protein, das massenhaft in oder
auf der Zelle vorkommt, mit einem stark
fluoreszierenden Marker zu versehen. „Wir
diskutieren stundenlang über die ideale
Kombination der Farbstoffe und die Moleküle,
die man detektieren will“, berichtet
Endl aus seinem Alltag. Zwar kann die Software
noch einiges ausbügeln, doch Endl
warnt: „Da muss man aufpassen, dass der
Wunsch nicht Vater des Gedankens wird.“
Eine gängige Stolperfalle ist Endl über
die Jahre immer wieder begegnet: Tote
Zellen. „Die kann man unheimlich gut mit
allen möglichen Antikörpern färben“, weiß
der Forscher, „dann bin ich erstmal hellauf
begeistert, dass eine Zellpopulation in
meiner Probe doppelt positiv gefärbt ist.“
Wichtig ist demnach, dass man auch Marker
zur Unterscheidung zwischen lebenden
und toten Zellen einsetzt. „Es gibt kaum
eine andere Technik, mit der man so viele
Eigenschaften von Zellen miteinander
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11/2015 Laborjournal