Klinische (bio)chemie en methodologie - NVKC

van de PCR-producten vindt plaats op een polyacrylamidegel
na kleuring met EtBr.
In dit onderzoek wordt duidelijk dat RNase niet de enige pitfall
is bij RNA-werkzaamheden zoals vaak benadrukt wordt in
de literatuur. De verschillende stappen in de procedure van
RNA-isolatie, cDNA synthese, PCR en detectie spelen ieder
een kritische rol.
Pitfalls in deze RT-PCR studies betreffen de RNA-integriteit
in paraffine coupes, target cDNA dat niet de vereiste lengte
bezit, storende co-amplificatie van genomisch DNA en tenslotte
niet-specifieke expressie van de tumormarker Muc-1.
Deze laatste pitfall werd bekend na checken van de gevoelig-
Diversen
58. Bed-side Glucose Monitoring in de Neonatologie
Up to 5% of the oxygen consumed by the mitochondrial electron
transport chain, results in formation of superoxide (O2-•).
In the present study we investigated which reactive oxygen
species are subsequently produced by NADH-oxidising submitochondrial
particles (SMPs) in the absence or presence of
exogenous iron complex.
Production of reactive oxygen species was induced by addition
of NADH to rotenone-inhibited SMPs of rat skeletal muscle,
in the absence or presence of iron chelate (ADP-Fe 3+ ). The
ESR spin trapping technique with DMPO was used for detection.
Rotenone-inhibited SMPs supplemented with NADH
produced hydroxyl radicals (OH•; detected as DMPO-OH
adduct). This OH• production was confirmed by addition of
ethanol, yielding the DMPO-CH3CHOH adduct. Hydroxyl
radical production was completely inhibited by superoxide
dismutase (S.O.D). as well as catalase, while addition of hydrogen
peroxide (H2O2) greatly enhanced OH• production.
These results strongly suggest that transition-metal complexes
in the SMP membrane are involved in the catalytic cleavage of
heid van de RT-PCR t.o.v de huidige immunohistochemische
technieken. Om uiteindelijk aan te kunnen tonen dat de
RT-PCR gevoeliger is, werden er verdunningsexperimenten
uitgevoerd met behulp van positieve cellen van de mammacarcinoom-
en de prostaatcarcinoomcellijnen. Uit de verdunningsexperimenten
m.b.t de sensitiviteit van de Muc-1 RT-
PCR bleek dat in alle jonge gezonde vrijwilligers die
gehanteerd werden als negatieve controle een lage expressie
van het Muc-1 gen te detecteren was. De conclusie die hieruit
volgt is dat er een ‘cut-off’waarde gesteld dient te worden en
dat de detectie van tumorgenen dient te geschieden m.b.v een
kwantitatieve RT-PCR.
H.J. HUIJGEN 1 , M. OFFRINGA 2 , M. NINTEMAN 1 , J.L.S. DOLS 1 en G.T.B. SANDERS 1
Academisch Medisch Centrum, Universiteit van Amsterdam, afdeling Klinische Chemie 1 en Neonatologie 2 , Amsterdam
Sinds enkele jaren wordt in het AMC in overleg met de Afdeling
Klinische Chemie op verpleegafdelingen gebruik gemaakt
van een bedside glucosemeter. Voor het gebruik in de neonatologie
bleek deze meter ongeschikt vanwege de hoge hematocriet
(Ht) bij pasgeborenen. Toch is snelle herkenning van ontregeling
van het glucose metabolisme bij zieke à terme en
premature pasgeborenen zeer belangrijk; hypoglycaemie komt
geregeld voor. Daarom hebben wij een studie gestart waarin
een nieuwe glucosemeter (Accutrend Sensor, Boeringer Mannheim/Lilly
BV) bij deze specifieke patiënten populatie is uitgetest.
Opzet. Bij 35 zieke pasgeborenen (zwangerschapduur 27-41
weken) werd na de hielprik volbloed aangebracht op de glucosestrip.
Tevens werd 25 ml fluoride bloed direct onteiwit
voor onze standaard glucose bepaling (glucose-dehydrogenase/NAD)
en werd de Ht uit hetzelfde monster volgens de
centrifugatie methode bepaald.
Resultaten. Van 30 patiënten waren alle drie parameters
beschikbaar. Accutrend glucose: gem 4,6; min 2,8; max 8,9
mmol/l; standaard glucose: gem 4,2; min 1,7; max 7,6 mmol/l;
Ht: gem 55; min 24; max 76%. Gemiddeld verschil 0,4
mmol/l; gepaarde t-test p=0,005. Vijf maal werd een “Error”
melding waargenomen: 3 maal buiten de specificaties van de
fabrikant (20%