Volumen 79 Número 1 - Sociedad Argentina de Oftalmología

Implante de epitelio corneal organotípico en el tratamiento del déficit de stem cells limbares
Materiales y métodos
Se utilizaron un total de 3 conejos de raza
Neocelandesa. Con un peso aproximado de
3000 gr., estos animales fueron mantenidos en
un hábitat con temperatura, humedad e iluminación
constante (ciclo de luz de 14 horas/ día),
alimentados con alimento balanceado y agua
natural ad-libitum y supervisados por un médico
veterinario, según las normas de nuestra institución.
La investigación fue llevada a cabo en el
Departamento de Investigación de la Facultad de
Ciencias Biomédicas de la Universidad Austral en
conjunto con el Departamento de Bioingeniería
de Tejidos de Laboratorios Craveri y la Fundación
Oftalmológica Argentina “Jorge Malbrán”, desde
marzo del 2003 hasta diciembre del 200 .
Se utilizaron dos modelos de DSCL: Uno antólogo,
en 1 conejos machos a los cuales se les lesionó
la córnea tras la aplicación de hidróxido de
sodio; y otro heterólogo en 20 conejos hembras,
en los que se produjo el DSCL mediante una queratectomía
laminar profunda incluyendo limbo.
Todo procedimiento invasivo fue realizado
bajo anestesia general con midazolam 0.2ml/kg
y ketamina 1.4ml/kg y tópica con colirios de proparacaína
y lidocaína. Los animales fueron tratados
según las normas de investigación en oftalmología
y visión en animales de ARVO (ARVO
Statement for the Use of Animals in Ophthalmic
and Vision Research). 12
Modelo de DSCL con Quemaduras por Álcalis
Para obtener un estado de DSCL similar a humanos
se utilizaron 1 conejos en los que se aplicó
sobre la superficie ocular una solución de 1M
NaOH durante 60 segundos, que luego fue lavada
con ClNa 0,9%. Posteriormente, se tomó una
muestra de tejido limbar de 2, 4 mm 2 del ojo
sano contralateral con un trépano de 1,8 mm.
de diámetro. Las células troncales así obtenidas
fueron aisladas, cultivadas y replicadas durante
21 días. Luego, estas células fueron colocadas en
una matriz de plasma, formándose una membrana
de 14 mm. de diámetro en condiciones de
ser implantada.
A los 60 días de producida la lesión por álcalis,
se realizó el implante de la neomembrana epitelial.
Se efectuó una periotomía de 360° seguida
de una queratectomía laminar que se extendió
hasta el limbo esclero-corneal con el objetivo de
lograr un lecho corneal adecuado. La lámina con
células troncales corneales fue colocada sobre el
estroma receptor, y se la suturó a la esclera perilimbar
con 8 puntos no continuos de sutura de
nylon 10-0.
El tratamiento postoperatorio fue con ciprofloxacina
0,3% cinco veces al día durante 10 días;
dexametasona 0,1% cuatro veces al día más ciclosporina
1% dos veces al día durante todo el
postoperatorio. La aplicación de láser argón sobre
neovasos corneales fue implementada en casos
de neovascularización del implante corneal.
El análisis clínico se realizó durante los 12 meses
postoperatorios y los animales fueron sacrificados
al primer mes (n= ), tercero (n= ), sexto
(n=3) y decimosegundo mes (n=2) postoperatorio
para estudiar los resultados mediante microscopía
óptica y electrónica. El análisis cuantitativo
de las mitosis celulares fue realizado visualmente
bajo microscopio, siguiendo un mismo método,
que consistió en la cuenta de mitosis en cinco
campos del 100X del espécimen histológico.
Cinco animales con descementocele y/o endoftalmitis
pre-transplante fueron excluidos del protocolo
y reemplazados por nuevos animales lesionados.
Modelo de DSCL con Queratectomía Laminar
Profunda incluyendo Limbo
Se utilizaron 1 conejos en los que se realizó
sobre un ojo sano una queratectomía laminar
profunda incluyendo limbo para reproducir un
estado deficitario de células troncales limbares.
Inmediatamente se colocó la neomembrana epitelial
heteróloga que había sido cultivada y replicada
bajo las mismas condiciones explicadas en
el modelo anterior pero a partir de una biopsia
de otro conejo (heterólogo). El grupo control fue
de conejos en los que solo se realizó la queratectomía
laminar profunda sin la implantación
de una neomembrana epitelial.
Los animales fueron tratados en el postoperatorio
con ciprofloxacina 0,3% cinco veces
al día, y dexametasona 0,1% durante 1 días.
El análisis histológico se realizó a los 30, 60 y 90
días. El análisis cuantitativo de las mitosis celulares
se realizó utilizando el mismo método que
en el modelo anterior.
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