Volumen 79 Número 1 - Sociedad Argentina de Oftalmología

Ferro, María Elena
(Th) activados a madurar hacia Th1 o Th2 3 . Los
primeros son responsables de desarrollar respuesta
inmune celular, importante en la defensa
contra patógenos intracelulares, y de inducir
un cambio de isotipo en los linfocitos B hacia
la síntesis de IgG1 e IgG3, isotipos fijadores de
complemento, importantes en la defensa contra
microorganismos extracelulares. En contraste,
los segundos son responsables de inducir cambio
de isotipo de los linfocitos B a la producción
de IgE e IgG4 isotipos involucrados en la defensa
contra grandes parásitos y en la respuesta alérgica
y no en la defensa contra microorganismos.
Estas células, Th1 y Th2, liberan interleuquinas
(IL) que son mutuamente inhibitorias 4 por lo
tanto es factible aceptar que elevados niveles de
las moléculas que uno de ellos producen implica
automáticamente inhibición de la función y disminución
de la síntesis de las moléculas sintetizadas
por el otro, y viceversa.
Contrariamente, la evolución de la barrera de
defensa en conjuntiva durante los primeros meses
de vida, etapa de inmadurez inmunológica,
ha sido pobremente estudiada. La dacrioestenosis
congénita nos provee de un excelente modelo
para conocer la capacidad de respuesta inmunológica
de la primera y segunda línea de defensa
de estos niños frente a la infección conjuntival.
Materiales y Métodos
Pacientes
Se estudiaron 191 niños entre 3 y meses, que
concurrieron a la consulta oftalmológica entre
Enero de 2002 y Febrero de 2004, que presentaban
clínica de dacrioestenosis congénita,
diagnosticada según criterios oftalmológicos ,
asociada a conjuntivitis y 66 pacientes normales
sanos de la misma edad como grupo control.
Cultivo y tipificación del material conjuntival
Las muestras fueron tomadas por hisopado de
la conjuntiva superior e inferior, y fueron inmediatamente
procesadas. La siembra se realizó en
placas de agar chocolate, Sabouraud-dextrosa y
caldo tioglicolato (Britania). Las placas de agar
chocolate y el caldo tioglicolato fueron incubados
durante 7 días a 37ºC antes de descartarse
[ 0 ]
como cultivos negativos. Las especies de cocos
y bacilos fueron identificados por los métodos
convencionales. 6
Identificación de Chlamydia Trachomatis, herpes
simplex 1 y 2 y adenovirus
Las improntas celulares fueron obtenidas por
centrifugación de las lágrimas y extracción del
sedimento, fijadas en alcohol y sometida a inmunomarcación
con anticuerpos monoclonales
específicos marcados con isotiocianato de fluoresceína.
La marcación fue observada en microscopio
de fluorescencia 7 .
Células infiltrantes en material conjuntival
Las improntas celulares fueron también coloreadas
con May Grünwald-Giemsa y observadas al
microscopio óptico para observar el tipo de infiltrado.
8
Determinación de IgA, IgG e IgM en lágrimas
La muestra fue obtenida por estimulación espontánea
y se las cuantificó por la técnica de Inmunodifusión
Radial Simple de alta sensibilidad
por métodos previamente descriptos 9 . Se utilizó
solución de agarosa diluida con buffer Veronal
al 3%, la cual fue mezclada con los distintos antisueros
específicos en las diluciones adecuadas
para alcanzar una sensibilidad de 0, mg%
aproximadamente. Luego de preparadas las
placas, fue agregado a cada reservorio ul de lágrima
en las diluciones convenientes e incubado
por 24-48 horas a temperatura ambiente. Luego
de este tiempo, los halos de precipitación fueron
leídos y comparados con controles de concentración
conocida.
Dosaje de IgE en lágrimas
La IgE fue cuantificada por ELISA en fase sólida
[10]. Los reservorios fueron cubiertos con anticuerpos
monoclonal murino anti-cadena ε humana.
lavadas con PBS-Tween 0.0 % y bloqueadas
con PBS-Tween-albúmina 0,01%. Posteriormente
fue agregado a cada reservorio 20 µl de la muestra
y de los controles de concentración conocida
los cuales fueron incubados por 30 minutos
a temperatura ambiente. Luego del lavado fue
agregado el agrega 1 0ul del conjugado enzimático
(anti-IgE policlonal marcada con peroxidasa),