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Vitaminas antioxidantes y estrés oxidativo MATERIAL Y MÉTODOS 87
B. Solución estándar
Se preparó una solución estándar de ~-tocoferol a una concentración de 4 mg/dl en
1
etanol con 0,025% de BHT. De esta solución se procesaron diariamente 50
de la misma
ji
manera que las muestras y se inyectaron en la columna antes de cada serie de análisis.
C. Condiciones cromato2ráficas
La cromatografía en fase reversa se llevó a cabo utilizando una bomba Waters 510,
un inyector Rheodyne (7125) con un puerto de inyección de 20 ji1 y una columna Macherey-
Nagel Cg (nucleosil) de 7 jim (10 cm x 4,6 mm) ó una columna Supelcosil LC-18
(tetracloruro de carbono) de 3 ji (15 cm 5< 4,6 mm).
La fase móvil fue metanol al 100% que fue bombeada isocráticamente a un flujo de
0,5 (columna Macherey-Nagel) ó 0,9 (columna Supelco) mí/mm. La presión media de la
columna era 2,5 PSI (26 bares). La separación cromatográfica se llevó a cabo a 25 + 20C.
La absorbancia se registré a 292 nm con un detector UV Gilson 115 de
longitud de onda variable (sensibilidad 0,02 unidades de absorbancia a fondo de escala) y se
utilizó un integrador Spectra-Physics.
El cálculo de la concentración de ~-tocoferol se llevó a cabo por relación con el área
de la solución estándar, mediante la siguiente expresion:
siendo:
cí-Tocoferol (p¿g/q tejido)
s: pg de estándar (2 ~g)
- x: g de tejido
área muestra
área estándar
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