72841-Platelia Toxo IgM.pdf - BIO-RAD

3. PRINCIPIO
Platelia Toxo IgM es una prueba que permite la detección cualitativa de los
anticuerpos IgM anti-T. gondii en suero o plasma humano mediante un
método inmunoenzimático por inmunocaptura de las IgM en fase sólida.
Se utilizan anticuerpos anti-cadena µ humana para sensibilizar la microplaca.
Se utiliza como conjugado una mezcla de antígeno T. gondii y anticuerpo
monoclonal anti-antígeno T. gondii marcado con peroxidasa. La aplicación de
la prueba consta de las etapas siguientes:
• Etapa 1
Las muestras a estudiar y los controles se diluyen en proporción 1/21 y se
depositan en los pocillos de la microplaca. Durante la incubación de 1 hora a
37ºC, las IgM son captadas por los anticuerpos anti-µ fijados a las cúpulas de
los pocillos de la microplaca. Las IgG y el resto de las proteínas séricas son
eliminadas mediante lavados al final de la incubación.
• Etapa 2
Se coloca el conjugado (mezcla de antígeno T. gondii y de anticuerpo anti-
T. gondii marcado con la peroxidasa) en todos los pocillos de la microplaca.
Durante esta incubación de 1 hora a 37°C, si la muestra probada contiene
anticuerpos IgM específicos de T. gondii, éstos se fijarán al conjugado. El
conjugado sobrante que no se une es eliminado mediante lavados al final de la
incubación.
• Etapa 3
La presencia de los complejos inmunes (anti-cadena µ humana / IgM anti-
T. gondii / Antígeno T. gondii / Anticuerpo monoclonal anti-T. gondii marcado
con peroxidasa) que se forman eventualmente es revelada mediante la adición
de una solución enzimática de revelado en cada pocillo.
• Etapa 4
Tras incubación a temperatura ambiente (+18-30ºC) la reacción enzimática se
detiene mediante la adición de una solución de ácido sulfúrico 1N. La
densidad óptica leída a 450/620 nm, interpretada en relación con un valor
umbral, permite confirmar o informar de la presencia de IgM anti-T. gondii en
la muestra probada.
35