72841-Platelia Toxo IgM.pdf - BIO-RAD

3. PRINCIPIO
Platelia Toxo IgM è un test qualitativo per la determinazione degli anticorpi
IgM anti-Toxoplasma gondii nel siero o nel plasma umano mediante
immunodosaggio enzimatico con cattura degli anticorpi IgM in fase solida.
Gli anticorpi anti-catene µ umane sono adesi alla fase solida (pozzetti della
micropiastra). Come coniugato viene utilizzata una miscela dell'antigene
T. gondii e dell'anticorpo monoclonale anti-antigene T. gondii marcato con
perossidasi. Il test prevede le seguenti fasi:
• Fase 1
I campioni dei pazienti, il calibratore e i controlli vengono diluiti in rapporto
1/21, quindi distribuiti nei pozzetti della micropiastra. Durante questa
incubazione di un'ora a 37°C, gli anticorpi IgM presenti nel campione si legano
agli anticorpi anti-µ adesi ai pozzetti della micropiastra. Gli anticorpi non
specifici non legati e altre proteine seriche vengono eliminati dai lavaggi
successivi all'incubazione.
• Fase 2
Il coniugato (miscela di antigene T. gondii e anticorpo monoclonale anti-
T. gondii marcato con perossidasi) viene aggiunto nei pozzetti della
micropiastra. Durante questa incubazione di un'ora a 37°C, il coniugato si lega
agli anticorpi IgM specifici anti-T. gondii. Il coniugato non legato viene
eliminato dai lavaggi successivi all'incubazione.
• Fase 3
La presenza di immunocomplessi (Anti-catene µ umane / IgM anti-T. gondii /
Antigene T. gondii / anticorpo anti-T. gondii marcato con perossidasi) viene
dimostrata attraverso l'aggiunta di una soluzione di sviluppo enzimatica in ogni
pozzetto.
• Fase 4
Al termine del periodo di incubazione a temperatura ambiente (18-30°C), la
reazione enzimatica viene bloccata attraverso l'aggiunta di una soluzione di
acido solforico 1N. La lettura della densità ottica ottenuta con uno
spettrofotometro impostato su 450/620 nm è proporzionale alla quantità di
anticorpi IgM anti-T. gondii presenti nel campione.
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