72841-Platelia Toxo IgM.pdf - BIO-RAD

7. Cubrir la microplaca con una película adhesiva apoyando bien sobre toda la
superficie para garantizar la estanqueidad, a continuación incubar
inmediatamente la microplaca al baño maría con termostato o en una
incubadora seca de microplacas durante 1 hora ± 5 minutos a 37°C ± 1°C.
8. Al final de la primera incubación, retirar el film adhesivo, aspirar el contenido
de todos los pocillos en un contenido para desechos contaminados (que
contienen hipoclorito de sodio) y proceder a 4 lavados con 350 µl de la
solución de lavado (R2). Secar las tiras empapándolas en una hoja de papel
absorbente y golpear ligeramente para eliminar la totalidad de la solución
de lavado.
9. Distribuir 200 µL de la solución de trabajo del conjugado (R6) en todos los
pocillos. Agitar delicadamente esta solución antes de usarla.
10. Tapar la microplaca de un film adhesivo apoyando bien sobre toda la
superficie para garantizar la estanqueidad. Incubar la microplaca al baño
maría con termostato o en una incubadora seca de microplacas durante
1 hora ± 5 minutos a 37°C ± 1°C.
11. Al final de la primera incubación, retirar el film adhesivo, aspirar el contenido
de todos los pocillos en un contenido para desechos contaminados (que
contienen hipoclorito de sodio) y proceder a 4 lavados con 350 µL de la
solución de lavado (R2). Secar las tiras empapándolas en una hoja de papel
absorbente y golpear ligeramente para eliminar la totalidad de la solución
de lavado.
12. Distribuir rápidamente, y al abrigo de la luz viva, 200 µL del cromógeno
(R9) en todas las cúpulas. Dejar la reacción desarrollarse en la oscuridad
durante 30 ± 5 minutos a temperatura ambiente (+18-30°C). Durante esta
incubación, no utilizar el film adhesivo.
13. Detener la reacción enzimática añadiendo 100 µL de la solución de parada
(R10) en cada pocillo. Adoptar la misma secuencia y el mismo ritmo de
distribución que para la solución de revelado.
14. Secar minuciosamente la parte de abajo de las placas. Leer la densidad
óptica a 450/620 nm con ayuda de un lector de placas en los 30 minutos
que siguen a la parada de la reacción. Las tiras deben conservarse siempre
al abrigo de la luz antes de la lectura.
15. Asegurarse, antes de la transcripción de los resultados, de la concordancia
entre la lectura y el plan de distribución de las placas y de las muestras.
8. CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
8.1 Cálculo del valor umbral (VU)
El valor umbral VU corresponde a la media de las densidades ópticas (DO) de
los duplicados del Calibrador (R4):
VU = media DO R4
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