Janvier 2003

Question 2 :A partir de ces données- Donner la valeur d'intensité de fluorescence correspondant à la protéine à l'état natif (YN)'Même question pour la protéine à l'état dénaturé (YD)'- Montrerqu'il est possible,dans la zone de transition,d'établirune relationentre la fractionde protéine à l'état dénaturée (fD), le signal mesuré (Y), le signal de la protéine à l'état natif (YN) , et lesignal de la protéine dénaturé (YD)-calculer la fraction dénaturée correspondant à une concentration en urée de 4 M.- Le tableau B donne la fraction dénaturée (fD)pour une gamme de concentration en urée.A partir de ces valeurs, calculer la stabilité conformationnelle de la protéine en absence dedénaturant.On rappelle que R=8,32 J mor1K1. Les expériences ont été réalisées à une températurede 300 KTableau BUrée lM)fD3.64 0.1094.24 0.3124.85 0.5945.45 0.84Vous pouvez au choix tirer cette valeur de la représentation graphique appropriée ou calculer cettevaleur en effectuant une régression linéaire sur ces données (dans ce cas, préciser la valeur de lapente, de l'ordonnée à l'origine ainsi que le coefficient de corrélation)Partie II: Spectroscopie infrarouge (durée conseillée: 20 min)Les questions A et B sont indépendantes.Les réponses à apporter sont purement qualitatives.Question A)On réalise l'expérience suivante:Une protéine est mise en solution dans un milieu référence. On collecte le spectred'absorption infrarouge correspondant. Après soustraction du spectre infrarouge de laréférence, on obtient le résultat de la figure 1 (trait gras).1) a) Que représentent les différentes courbes juxtaposées au spectre (traits pointillés) ?b) Comment leur position est-elle déterminée (citez deux possibilités) ?c) Quel type d'information permettent-elles d'obtenir?2) L'échantillon est chauffé lentement de 20°C à 70°C, et on collecte un spectre d'absorptioninfrarouge tous les 10°C. Après soustraction du spectre infrarouge de la référence, onobtient les spectres représentés sur la figure 2. Quel type d'information peut-on tirer d'unetelle expérience?Question B)1) Décrivez succinctement en quoi consiste la méthode de spectroscopie infrarouge dite« ATR » (Attenuated Total Reflection )P::tge 2 !';nTnn tot2lJ de :1