HYPERTONIA ÉS NEPHROLOGIA - eLitMed.hu

More documents

Recommendations

Info

EREDETI KÖZLEMÉNYEK / ORIGINAL ARTICLES A metilglioxál sejtkárosító hatásának vizsgálata izolált vörösvértestekben – a glomerularis típusú vörösvértestek képzõdésének modellje Detrimental effects of methylglyoxal on isolated red blood cells – a model of glomerular-type red blood cell formation Wagner Zoltán, Degrell Péter, Mazák István, Vas Tibor, Molnár Gergõ Attila, Wagner László, Laczy Boglárka, Tamaskó Mónika, Nagy Judit, Wittmann István Pécsi Tudományegyetem, Általános Orvostudományi Kar, II. Sz. Belgyógyászati Klinika és Nephrológiai Centrum, Pécs HYPERTONIA ÉS NEPHROLOGIA 2005; 9 (1):24–29. ÖSSZEFOGLALÁS Glomerulonephritisekben glomerularis típusú, dysmorph vörösvértestek kerülnek a vizeletbe. Ugyanakkor glomerulonephritisekben fokozott a karbonilstressz, ami magas metilglioxál szinttel jár. A metilglioxál intracelluláris kalciumakkumulációt okoz és fokozza a szabadgyök-képzõdést. Tanulmányunkban arra kerestük a választ, hogy a vörösvértestekben a metilglioxál kalcium akkumulációt okozó hatása szabad gyökös folyamatokon keresztül jön-e létre, valamint megvizsgáltuk, hogy metilglioxál hatására kialakulnak-e glomerularis típusú vörösvértest alakok. Egészséges egyénektõl nyert 0,1%-os vörösvértest szuszpenziót 37 °C-on inkubáltunk metilglioxál különbözõ koncentrációival. Fluoreszcens indikátorok segítségével mértük az intracelluláris kalcium szintet és az intracelluláris szabadgyök-képzõdést. Fénymikroszkópos vizsgálattal határoztuk meg a glomerularis típusú vörösvértestek arányát, és pásztázó-elektronmikroszkópos vizsgálatot is végeztünk. A metilglioxál kalcium akkumulációt és szabadgyök-képzõdést eredményezett az izolált vörösvértestekben. Ezen hatások antioxidánsokkal kivédhetõk voltak, ami arra utal, hogy a metilglioxál oxidatív stressz keltésén keresztül vezet kalcium akkumulációhoz. Metilglioxál hatására glomerularis típusú vörösvértestek jöttek létre. Eredményeink alapján a glomerularis haematuriában megfigyelhetõ dysmorph vörösvértest alakok képzõdésében fontos szerepe lehet a fokozott karbonil és oxidatív stressznek. Kulcsszavak: vörösvértest, glomerularis haematuria, metilglioxál, oxidatív stressz, kalcium SUMMARY In glomerulonephritis glomerular type, dysmorphic red blood cells can be found in the urine. Glomerulonephritides are characterized by increased carbonyl stress and elevated methylglyoxal levels. Methylglyoxal causes intracellular calcium accumulation and induces the formation of free radicals. In the present study we investigated whether the effect of methylglyoxal causing calcium accumulation in red blood cells evolves through increased free radical production. Furthermore, we studied, whether methylglyoxal can lead to the formation of glomerular-type red blood cells. 0,1% red blood cell suspensions from healthy volunteers were incubated with different concentrations of methylglyoxal at 37°C. We measured the intracellular calcium level and production of intracellular free radicals using fluorescent indicators. We determined the ratio of glomerular-type red blood cells, and we also performed scanning electron microscopy. Methylglyoxal caused accumulation of calcium and production of free radicals in isolated red blood cells. These effects could be prevented using antioxidants, indicating that methylglyoxal causes calcium accumulation through oxidative stress. In the presence of methylglyoxal, glomerular-type red blood cells were formed. According to our findings, carbonyl and oxidative stress could play an important role in the formation of dysmorphic red blood cells in glomerular hematuria. Keywords: red blood cell, glomerular hematuria, methylglyoxal, oxidative stress, calcium Levelezési cím: Dr. Wagner Zoltán Pécsi Tudományegyetem, Általános Orvostudományi Kar II. Sz. Belgyógyászati Klinika és Nephrologiai Centrum 7624 Pécs, Pacsirta u. 1. RÖVID TARTALOM Bevezetés Módszerek Eredmények Megbeszélés KÖSZÖNETNYILVÁNÍTÁS Jelen tanulmány az OTKA T-043788, az FKFP 06615 és az ETT 562/2003 számú pályázat, illetve a Magyar Tudományos Akadémia részérõl dr. Wagner László számára megítélt Bolyai János Kutatási Ösztöndíj támogatásával készült.
2005; 9 (1):24–29. A METILGLIOXÁL SEJTKÁROSÍTÓ HATÁSÁNAK VIZSGÁLATA IZOLÁLT VÖRÖSVÉRTESTEKBEN 25 BEVEZETÉS Ismert, hogy glomerulonephritisekben fokozott az oxidatív stressz (1). Az oxidatív stressz, vagyis az oxigén szabad gyökök felszaporodása reaktív dikarbonilok képzõdését eredményezi. Az egyik legjelentõsebb dikarbonilmolekula, a metilglioxál (MGO), mely képzõdhet a glükóz vagy egyéb szénhidrátok, illetve a Schiff-bázisok és az Amadori-termékek vas által katalizált autoxidációja révén (2, 3), de keletkezhet nem oxidatív mechanizmussal is, trióz foszfátokból (glicerinaldehid- 3-foszfát, dihidroxiaceton-foszfát), aminoacetonból a treonin lebontása során és acetonból a ketontestek katabolizmusa révén (4). A metilglioxál és egyéb reaktív dikarbonilok akkumulációját karbonilstressznek nevezzük. A reaktív dikarbonilok a fehérjékhez kapcsolódva karbonilstressz-termékek kialakulásához vezetnek. Karbonilstressz-termékek lerakódását figyelték meg diabeteses és IgA-nephropathiás betegek veseszövettani mintáiban (5). Bizonyos glomerulonephritisek egyik, olykor egyetlen tünete a glomerularis haematuria (6). A haematuria glomerularis eredetére utal, ha a vizeletüledékben megkisebbedett, különbözõ nagyságúvá és változó alakúvá deformálódott vörösvértestek láthatók. Különösen jellegzetesek azok a glomerularis típusú vvt-alakok, amelyek felszínén egy, két, ritkán három vagy több membrán kiboltosulás figyelhetõ meg. A metilglioxál megzavarja a sejtek intracelluláris kalciumháztartását, kalciumakkumulációt okoz (7, 8). A magas intracelluláris kalcium koncentráció a vvt-ekben a sejtmembrán rigiditásának fokozódásához vezet. In vitro kísérleteink szerint a metilglioxál az aminocsoportot tartalmazó molekulák módosítása során szabadgyök-képzõdést vált ki (9). Irodalmi adatok szerint a szabadgyök-képzõdés befolyásolhatja a vvt-ek intracelluláris kalcium homeosztázisát (10). Jelen tanulmányunkban azt vizsgáltuk, hogy a metilglioxál hatása a vvt-ek intracelluláris kalcium szintjére oxidatív stressz kiváltásán keresztül jön-e létre, és hogy kialakulnak-e ennek kapcsán jellegzetes, deformált, glomerularis típusú vvt-alakok. MÓDSZEREK Vizsgálatainkhoz írásos beleegyezést követõen egészséges önkéntesektõl Vacutainer ® rendszerben vettünk vért heparint tartalmazó csövekbe. A plazma és a buffy coat eltávolítására a mintákat 2400 g-vel centrifugáltuk 5 percig. A vvt-üledéket háromszor mostuk 7,4-es pH-jú, 145 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgSO 4 , 0,5 mM Na 2 HPO 4 , 10 mM hidroxietil-piperazin-etánszulfonsav (HEPES) és 5 mM glukóz tartalmú pufferben. A mosott vvt-eket 7,4-es pH-jú, 125 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1 mM MgSO 4 , 0,1 mM CaCl 2 , 60 mM HEPES és 5 mM glükóztartalmú puf- kalciumakkumuláció (%) oxidatív stressz (%) 20 18 16 14 12 10 250 200 150 100 50 0 8 6 4 2 0 ferben reszuszpendáltuk. A vvt-szuszpenzió hematokritját sejtszámláló segítségével 0,1%-ra állítottuk be. A vvt-eket dichlorofluoresceinnel (5 M, 20 perc) és fura-2-pentakisacetoximetilészterrel (Fura-2-AM, 1 M, 30 perc) inkubáltuk. A dichlorofluorescein fluoreszcenciáját, melyet az intracelluláris szabad gyökök váltanak ki, 504 nm excitációs és 526 nm emissziós hullámhosszon mértük (11). A szabad, ionizált kalcium intracelluláris koncentrációját Fura-2-AM segítségével, a Grynkiewicz és munkatársai (12) által leírtak szerint határoztuk meg. A méréseket Hitachi F-4500 fluoreszcens spektrofotométerrel (Hitachi, Tokyo, Japán), végeztük 37 o C-on. A vvt ülepedésének megelõzésére folyamatos, alacsony sebességû automatakeverést alkalmaztunk. A fluoriméter vezérléséhez a Multi- 31,2 62,5 125 250 500 1000 metilglioxál ( M) 31,2 62,5 125 250 500 1000 metilglioxál ( M) 1. ábra. A metilglioxál koncentrációfüggõ módon okoz oxidatív stresszt (felsõ panel) és kalcium akkumulációt (alsó panel) humán vörösvértestekben. Az ábrán hat független mérés átlagát (SD) tüntettük fel, 100 M ferrovas hatását vettük 100%-nak.
Page 1 and 2: 2005; 9 (1):1-64. Alapító elnök:
Page 3 and 4: BEVEZETÕ Bevezetõ Prof. Dr. Radó
Page 5 and 6: 2005; 9 (1):4-13. A FAGYÁSPONTCSÖ
Page 15 and 16: 2005; 9 (1):14-18. NOVEL INSIGHTS I
Page 17 and 18: 2005; 9 (1):14-18. NOVEL INSIGHTS I
Page 19 and 20: ÖSSZEFOGLALÓ KÖZLEMÉNYEK / REVI
Page 21 and 22: 2005; 9 (1):19-23. A SANDIMMUN FELF
Page 23: 2005; 9 (1):19-23. A SANDIMMUN FELF
Page 27 and 28: 2005; 9 (1):24-29. A METILGLIOXÁL
Page 29 and 30: 2005; 9 (1):24-29. A METILGLIOXÁL
Page 31 and 32: 2005; 9 (1):30-34. SZÉRUM-PREALBUM
Page 33 and 34: 2005; 9 (1):30-34. SZÉRUM-PREALBUM
Page 35 and 36: EREDETI KÖZLEMÉNYEK / ORIGINAL AR
Page 37 and 38: 2005; 9 (1):35-40. A PD-KIFOLYÓ OL
Page 39 and 40: 2005; 9 (1):35-40. A PD-KIFOLYÓ OL
Page 41 and 42: JUBILEUMI DÍSZOKLEVÉL ÁTADÁS A
Page 43 and 44: 2005; 9 (1):41-45. ÜNNEPI BESZÉD
Page 45 and 46: 2005; 9 (1):41-45. ÜNNEPI BESZÉD
Page 47 and 48: 2005; 9 (1):46-47. 47 mennyiség al
Page 49 and 50: 2005; 9 (1):48-61. KONGRESSZUSI HÍ

HYPERTONIA ÉS NEPHROLOGIA - eLitMed.hu

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?