Valorizzare l'allevamento e i prodotti della razza autoctona Nera di ...

accolta del materiale seminale, valutazione e crioconservazione
nella fase iniziale della creazione della riserva genetica della nera di Verzasca, la raccolta del materiale
seminale di 7 donatori è avvenuta contestualmente alla sperimentazione prevista nel Progetto Interreg
Italia-Svizzera 2007-2013, avente come obiettivo la valutazione della fattibilità dell’utilizzo dell’inseminazione
artificiale nel contesto ambientale e produttivo di questa razza. Il materiale seminale raccolto durante queste
sperimentazioni è stato prevalentemente destinato alle fecondazioni artificiali effettuate direttamente in
allevamento. Facendo coincidere i prelievi di materiale seminale sia per le sperimentazioni sopra citate che
per la costituzione di LABank, il materiale destinato alla costituzione della riserva genetica consisteva nel
raccolto ottenuto dal terzo salto, caratterizzato per motivi fisiologici da un ridotto volume e da una scarsa
concentrazione spermatica, oppure dall’eccedenza del materiale seminale raccolto, non utilizzato per le
fecondazioni artificiali. Per ciascun donatore è stata anche effettuata una registrazione del peso corporeo e
dei caratteri sessuali secondari quali circonferenza scrotale, lunghezza e diametro delle corna, con l’obiettivo
di valutare l’esistenza di una relazione tra questi caratteri e la qualità del materiale seminale raccolto
(Tab. 1). Il materiale seminale di ciascun becco è stato raccolto direttamente in allevamento utilizzando una
vagina artificiale e una femmina in estro per simulare l’accoppiamento. In seguito alla raccolta in provetta
graduata i campioni di seme ottenuti sono stati diluiti a temperatura ambiente con il diluente commerciale
Ovixcell® (IMV Technologies, Piacenza, Italy) al rapporto di 1:1, con lo scopo di proteggere e nutrire le cellule
spermatiche durante le fasi di trasporto, analisi e congelamento. La sospensione spermatica diluita è stata
quindi refrigerata a +5°C con un termostato portatile entro 30 minuti dalla raccolta e trasportata nei laboratori
dell’IBBA-CnR. In laboratorio, per ciascun campione, sono stati valutati i seguenti parametri qualitativi:
volume, concentrazione spermatica, numero totale di spermatozoi per eiaculato, motilità totale e parametri
cinetici, vitalità e anomalie morfologiche (Tab. 1)
concentrazione
La concentrazione spermatica è stata stimata utilizzando un colorimetro, strumento utilizzato per misurare
la densità ottica di una soluzione. In questo caso è stata misurata la torbidità dell’eiaculato, convertendo
quindi la trasmittanza (quantità di luce che passa attraverso il campione) in concentrazione spermatica
utilizzando una tabella di conversione precedentemente stabilita.
Motilità
Per la valutazione della motilità un’aliquota del materiale seminale è stata diluita con lo stesso diluente
utilizzato al momento del prelievo (Ovixcell®) e incubata per 20 minuti a 37°C in bagno termostato. I campioni
di materiale seminale sono stati valutati attraverso un analizzatore automatico d’immagine (Computer
Assisted Semen Analysis - CASA) (Fig. 2a) costituito da un microscopio ottico dotato di tavolinetto riscaldato
e un obiettivo a contrasto di fase negativo BM 20x, una videocamera interfacciata a un videoregistratore, un
monitor nel quale compare l’immagine del campo visibile nel microscopio ed un secondo monitor nel quale
la stessa immagine appare convertita dal software in forma digitale che consente di individuare gli spermatozoi
e ricostruirne le tracce per unità di tempo. Le variabili analizzate di maggiore interesse sono: motilità
percentuale (% MOT), velocità intermedia (VAP), velocità rettilinea (VSL), velocità curvilinea (VCL), linearità
(LIn) (vedi Fig. 2b).
FigUra 2
a) AnALIZZATORe AUTOMATICO d’IMMAGIne, CASA. b) PARAMeTRI CIneTICI deGLI SPeRMATOZOI
52
a b
VALORIZZARe L’ALLeVAMenTO e I PROdOTTI deLLA RAZZA AUTOCTOnA neRA dI VeRZASCA neGLI eCOSISTeMI MOnTAnI