Valorizzare l'allevamento e i prodotti della razza autoctona Nera di ...

Vitalità
La determinazione della vitalità è stata effettuata mediante l’utilizzo di due fluorocromi: Ioduro di Propidio
(PI) e SYBR-14 (LIVe/deAd® Sperm Viability kit Sigma Aldrich, Milan, Italy). A un’aliquota di ciascun eiaculato
sono stati aggiunti 1 microlitro di SYBR-14 e 1,25 microlitri di PI. dopo 15 minuti di incubazione in camera
oscura, i campioni di materiale seminale di ciascun becco sono stati analizzati attraverso un microscopio
a fluorescenza per determinare la percentuale di cellule vive (colorazione verde, SYBR) e di cellule morte
(rosse, PI), (Fig. 3a).
anomalie Morfologiche
La valutazione della presenza o meno di anomalie morfologiche è stata eseguita utilizzando la colorazione
eosina-nigrosina, essenziale per far risaltare le strutture anatomiche delle cellule (Fig. 3b). La colorazione
è stata preparata come indicato da Bakst e Cecil (1997). Per ciascun riproduttore 10 microlitri di materiale
seminale sono stati diluiti con 500 microlitri della soluzione colorante eosina-nigrosina. dopo due minuti di
incubazione, 10 microlitri della soluzione sono stati fissati su un vetrino di lettura. Successivamente, attraverso
l’utilizzo di un microscopio a contrasto di fase, sono state contate 200 cellule per vetrino, valutando
l’integrità delle strutture deputate al movimento e alla funzionalità della cellula stessa.
FigUra 3
a) SPeRMATOZOI VIVI e MORTI AnALIZZATI MedIAnTe COLORAZIOne A FLUOReSCenZA. b) VALUTAZIOne MORFOLOGICA deGLI
SPeRMATOZOI In Un CAMPIOne COLORATO COn eOSInA-nIGROSInA, OSSeRVATO AL MICROSCOPIO OTTICO
a b
Il materiale seminale raccolto, in seguito alle valutazioni, è stato ulterioremente diluito sempre con il
diluente Ovixcell® (IMV Technologies, Piacenza, Italy) in modo da ottenere una concentrazione finale di
300x10 6 spermatozoi/paillettes. Successivamente il seme diluito è stato confezionato in paillettes da 0.5 ml
CBS ad alta sicurezza biologica, in modo da escludere una possibile contaminazione da paillettes a paillettes
e da ambiente esterno a contenuto della paillettes. Ciascune dose di materiale seminale prodotta è
contrassegnata con un’etichetta riportante la razza, la matricola dell’animale e la data di produzione. Infine
le paillettes sono state esposte per 15 minuti ai vapori di azoto liquido (-196°C) e successivamente sono state
immerse direttamente in azoto liquido.
gestione delle informazioni relative al materiale genetico stoccato
Tutte le informazioni relative ai donatori, al materiale genetico stoccato e alla localizzazione dei campioni
conservati presso LAbank sono state archiviate utilizzando il software CryoWeb, appositamente creato per
la gestione delle criobanche. Inoltre LABank e Comunità Montana Valli del Verbano partecipano al Network
delle Criobanche delle Risorse Genetiche Animali Italiane (CRIONET-IT) (http://www.genrescryonet.unimi.
it/) creato nel 2010 dall’IBBA-CnR e dal dipartimento di Scienze e Tecnologie Veterinarie per la Sicurezza
Alimentare della Facoltà di Medicina Veterinaria dell’Università di Milano (VSA-UnIMI) allo scopo di facilitare
lo scambio di informazioni tra le raccolte di materiale genetico create negli anni passati in Italia e favorire lo
sviluppo di forme di collaborazione e coordinamento.
risultati e conclusioni
Complessivamente il materiale seminale raccolto è di buona qualità (Tab. 1), con una motilità totale media
pari all’87%, una vitalità media intorno al 65% e la scarsa presenza di anomalie spermatiche, inferiori al 5%.
Risultano invece scarsi i valori relativi al volume di materiale seminale raccolto (ml) e al numero totale di
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