Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Genetisk variasjon hos jordskokk<br />
Prosedyre ved isolasjon av Total DNA fra plantevev<br />
ved bruk av DNeasy Plant Mini Kit<br />
Utstyr: Plantemateriale, vekt, skalpellblader, veieskip, eppendorfrør,<br />
varmeblokk, mikropistill, is, isoporeske til å ha is i, DNeasy Plant mini kit<br />
fra QIAGEN.<br />
Fremgangsmåte:<br />
1. DNeasy Plante prosedyre er optimalisert for et maksimum av<br />
100mg våt vekt start materiale. Bruk av for mye materiale vil gi<br />
ufullstendig lysering <strong>og</strong> lav renhet.<br />
2. Bruker en mikropistill til å knuse plantemateriale godt. Passet på<br />
at det ikke var klumper i materialet.<br />
3. Tilsatte 400µl av Buffer AP1 <strong>og</strong> 4µl av RNase A stam<br />
løsning(100mg/ml).<br />
4. Inkuberte blandingen i 10minutter ved 65°C. Blandet 2-3ganger<br />
under inkubasjonen ved å vende røret. Dette lyserte cellene <strong>og</strong><br />
bryter ned RNA.<br />
5. Tilsatte 130µl Buffer AP2 til lysatet <strong>og</strong> blandet. Inkuberte i<br />
5minutter på is. Dette steget tok bort detergenter, proteiner <strong>og</strong><br />
polysakkarider.<br />
6. Sentrifugerte i 1 minutt på max speed (14000rpm).<br />
7. Tilsatte lysatet til QIAshredder Mini Spin Column (lilla) plassert i<br />
en 2ml oppsamlingsrør (medfølger i kitet) <strong>og</strong> sentrifugerte i<br />
2minutter ved 20000 x g (14000rpm). Dette fjernet det meste<br />
cellematerialet, men en liten del vil nok ha passert gjennom <strong>og</strong><br />
dannet en pellet i oppsamlingsrøret.<br />
8. Overførte væsken som gikk gjennom membranen fra forrige steg<br />
til et nytt rør uten å forstyrre en eventuell pellet i bunnen av<br />
oppsamlingsrøret.<br />
11
Change language