Forord - Skog og landskap

Genetisk variasjon hos jordskokk
Med 95°C i 10 minutter, 94°C i 45 sekunder, 52°C i 45 sekunder, 72°C i
45 sekunder, 72°C i 7 sekunder og når selve prosessen er ferdig 4°C
resten av tiden.
Prosedyre av laging av agarose gel elektroforese
Bakgrunn
Agarose gel elektroforese er den enkleste og vanligste måten å separere
DNA etter størrelse og analysere DNA på. Prinsippet baserer seg på at
makromolekyler separeres på bakgrunn av sin bevegelsesfart gjennom
gelen i et elektrisk felt(Campbell & Reece, 2002. #3). For DNA er
migrasjonsraten, hvor langt molekylet beveger seg mens strømmen er på,
invers proporsjonal med molekylets størrelse. Nukleinsyrer har negativt
ladde fosfatgrupper proporsjonale til sin lengde, men fibrene i gelen
forhindrer bevegelse av lange fragmenter mer enn korte. DNA avsettes i
små brønner på den negativt ladde polen av gelen, når strømmen slåes på,
vandrer de mot den positive polen på grunn av de negativt ladde
fosfatgruppene. Meningen med gelen kan være å se på DNA eller isolere
et spesielt bånd. DNA visualiseres i gelen ved å tilsette ethidiumbromid.
Dette binder sterkt til DNA ved å interkalere mellom basene og er
fluoriserende, som betyr at det absorberer usynlig UV lys og overfører
energien som synlig lys. Ulike konsentrasjoner av gelene fører til ulik
oppløsning på gelen, slik at man noen ganger må prøve seg fram for å
finne den konsentrasjonen som separerer fragmentene best.
Laging av 2% agarosegel (2% gel, 100ml).
Utstyr: Veieskip, agarose, vekt, erlenmeyerkolbe, 1x TAE,
mikrobølgeovn, ethidiumbromid.
19