Posters - Sociedade Brasileira de Hipertensão

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O GENE DA RENINA E A HIPERTENSÃO ESSENCIAL:
ESTUDO DE ASSOCIAÇÃO DO POLIMORFISMO MboI EM
CAUCASÓIDES
MAN Medeirosa , FD Fuchsb , I Roisenberga a b Departamento de Genética, Instituto Biociências e Serviço de Cardiologia, Hospital de
Clínicas de Porto Alegre. Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre-RS
A hipertensão essencial (HTE) é um grupo heterogêneo de doenças que engloba formas muito raras de
síndromes hipertensivas mendelianas até alterações multifatoriais muito comuns, nas quais existe uma complexa
interação entre genes com baixa penetrância e fatores ambientais. O sistema renina-angiotensina (SRA)
apresenta um papel central na regulação da pressão sangüínea. A renina é uma enzima chave do SRA,
iniciando a cascata de reações que resulta na produção de angiotensina II, um potente vasoconstritor. Dessa
maneira, o gene da renina é considerado um bom candidato para estudos que buscam a elucidação das bases
genéticas da hipertensão essencial (HTE). O gene da renina está localizado no cromossomo 1 (1q32-42), é
composto por 10 exons que compreendem aproximadamente 12 kb. Um polimorfismo no íntron 9 do gene
da renina, reconhecido pela endonuclease de restrição MboI, foi associado com a susceptibilidade à HTE em
diferentes grupos étnicos, entretanto os resultados ainda não são conclusivos. O objetivo deste trabalho foi
verificar a distribuição do polimorfismos MboI em caucasóides do Sul do Brasil e avaliar a possível associação
desse polimorfismos com a HTE nesta população.
Métodos: O estudo compreendeu um total de 200 indivíduos, sendo 100 hipertensos (59,8 ± 10,1 anos) selecionados
no Ambulatório de Hipertensão do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e 100 indivíduos da população em
geral (57,8 ± 8,2 anos), utilizados como grupo controle. Através da reação em cadeia da polimerase (PCR), os
indivíduos foram genotipados para o polimorfismo MboI do gene da renina. Um fragmento de 250 pb foi amplificado
utilizando os primers apropriados. A presença do sítio de restrição para MboI (alelo +) resulta em dois
fragmentos de 171 pb e 79 pb. Na ausência do sítio, o fragmento de 250 pb permanece intacto (alelo -). As
freqüências alélicas nos dois grupos foram comparadas pelo teste de Chi-quadrado (c 2 ).
Resultados e Conclusões: Distribuição das freqüências alélicas e genotípicas do polimorfismo MboI do
gene da renina no grupo hipertenso e controle.
Polimorfismo MboI Controles (n = 100) Hipertensos (n = 100)
+ + 13 7
Genótipos + - 37 43
- - 50 50
χ2 Alelos +
= 2,25; df = 2; P = 0,32
63 57
- 137 143
χ 2 = 0,43; df = 1; P = 0,51
A distribuição genotípica, no grupo hipertenso e controle, está em Equilíbrio de Hardy-Weinberg. A freqüência
do alelo (+) do polimorfismo para MboI na população em geral foi de 31.5%, compatível com a freqüência
observada para este polimorfismo em diferentes grupos de normotensos encontrados na literatura, cuja freqüência
varia de 24% à 36%. Não foram encontradas diferenças significativas entre hipertensos e o grupo controle
quanto à distribuição alélica do polimorfismo MboI (c 2 = 0,43; p = 0,51). Assim sendo, em relação à população
estudada, os nossos resultados sugerem que o polimorfismo MboI não está associados com a HTE.
157 PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DA NEP-LIKE 158
DE CÉLULAS MESANGIAIS EM CULTURA
F Ebihara, GS Di Marco, MCC Andrade, MA Juliano, DE Casarini
UNIFESP – São Paulo
Introdução: A regulação da pressão arterial se faz com o balanço entre hormônios vasopressores e
vasodepressores sistêmicos e locais. A importância do sistema vasodepressor parece residir num
papel regulador da pressão sangüínea e patogênese da hipertensão. Os sistemas vasodepressores
calicreína-cinina e prostaglandinas, bem como o sistema vasopressor renina-angiotensina, estão relacionados,
participando do controle da pressão arterial. As células mesangiais (CM) têm uma função
biológica complexa e são alvo de uma variedade de substâncias vasoativas capazes de modificar
o processo de filtração renal. A bradicinina (BK) é um peptídeo vasoativo que participa da regulação
da função renal, incluindo excreção de água e sódio, e síntese de prostaglandinas, sendo que sua
concentração intrarenal depende da sua produção pela calicreína e degradação pelas cininases. Inicialmente
identificamos doze enzimas com atividade cininásica no intracelular e meio de cultura de
células mesangiais primárias. Uma vez encontrado o mesmo perfil enzimático para as células
mesangiais imortalizadas (CMI), neste trabalho, purificamos e caracterizamos parcialmente a
endopeptidase neutra (NEP) no intracelular destas células.
Métodos: As CMI cultivadas em meio de cultura DMEM suplementado com 5% de Soro Bovino
Fetal (SBF) foram mantidas por 24 horas sem o SBF antes do experimento. O lisado celular foi
submetido a uma gel filtração em resina AcA-44. A atividade enzimática foi monitorada utilizandose
os substratos fluorogênicos Abz-BKQ-EDDnp, Abz-FDQ-EDDnp e Abz-rRL-EDDnp. A caracterização
inicial foi feita utilizando-se o inibidor específico da NEP, tiorfan.
Resultados: A enzima foi parcialmente purificada 1,27 vezes e apresentou atividade específica de
3579,68 U/mg. A NEP-like hidrolisou a molécula de BK nas ligações peptídicas Gly 4 -Phe 5 e Pro 7 -
Phe 8 , analisados por HPLC com detecção ultra-violeta. Utilizando-se western blotting, verificou-se
a ligação da enzima com o anticorpo monoclonal anti-NEP, sugerindo, portanto, ser a enzima analisada
semelhante à NEP.
Conclusões: A NEP é sintetizada pelo rim e excretada na urina, sendo uma das maiores enzimas
presentes na urina de rato e humana. Neste trabalho, identificamos a CM como um possível sítio
adicional de produção de NEP, podendo alterar profundamente a função renal independentemente
de modificações hemodinâmicas sistêmicas, através da sua ação sobre diferentes peptídeos biologicamente
ativos. O estudo dessa enzima poderia ser útil para o entendimento das ações dos inibidores
usados no tratamento da hipertensão, uma vez que esta enzima pode hidrolisar a BK e está presente
nos mesmos locais da enzima conversora de angiotensina I; e ainda é capaz de produzir Angiotensina
1-7 a partir de Angiotensina I, peptídeo este importante no contrabalanço das ações da Angiotensina
II. A possibilidade da hipertensão resultar tanto do excesso de substâncias vasopressoras, como
deficiência de substâncias vasodepressoras, tem estimulado a procura de modelos experimentais
com ratos e/ou cultura de células, que facilitem o estudo desses sistemas hormonais na patogenia
dos vários tipos de hipertensão.
Sem título-32 47
26/06/03, 15:13
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Posters
TREINAMENTO ALTERA A COMPOSIÇÃO CORPORAL
DE RATAS SHR CASTRADAS
1 1 1 2 1 Lima MS**, Koo EN**, Tostes RCA, Michelini LC, Carvalho MHC
1 2 Departamento de Farmacologia - ICB/USP, Departamento de Fisiologia e Biofísica
– ICB/USP
Objetivos: O objetivo do presente estudo é verificar o efeito do exercício e da ooforectomia nos
pesos (corporal, coração, ventrículo esquerdo e músculo espinotrapézio) de ratas espontaneamente
hipertensas (SHR), em estro fisiológico e castradas.
Métodos: Foram utilizadas ratas SHR em estro fisiológico, sedentárias (EFS) e treinadas (EFT) e
ooforectomizadas, sedentárias (OOFS) e treinadas (OOFT). A castração foi realizada com 13 semanas
(fase de hipertensão estabelecida e maturidade sexual) e o treinamento físico de baixa intensidade
(40% TEM) foi iniciado para os dois grupos (EFT e OOFT) com 17 semanas de idade e duração
de 13 semanas. Foram analisados os pesos: total (PT), do coração (CO), ventrículo esquerdo (VE),
músculo espinotrapézio (ESP) e gordura retroperitoneal (RETRO).
Resultados (média ± EPM): O PT (g) dos grupos OOF mostrou um aumento de 20% em relação
aos grupos EF (OOF = 246,8 ± 2,07, n = 35 vs. EF = 205,6 ± 1,8, n = 46, p < 0,0001). O treinamento
aumentou o PT (g) somente no grupo EF (EFT = 210,0 ± 2,5, n = 24 vs. EFS = 201,3 ± 2,6, n = 22,
p < 0,05). A ooforectomia aumentou a massa seca do ESP (g/100g peso corpóreo) (OOF = 0,0209 ±
0,0005, n = 28 vs. EF = 0,0175 ± 0,0005, n = 27, p < 0,05) e diminuiu a do CO (g/100 g peso
corpóreo ) (OOF = 0,0884 ± 0,0011, n = 27 vs. EF = 0,0988 ± 0,0011, n = 27, p < 0,05). O treinamento
aumentou a massa seca do VE nos grupos T (g/100 g peso corpóreo) (T = 0,0755 ± 0,0009, n
= 29 vs. S = 0,0728 ± 0,0009, n = 28, p < 0,05). Não foram detectadas diferenças na RETRO.
Conclusões: Estes índices sugerem que a ooforectomia bem como o treinamento físico alteram a
composição corporal de ratas SHR, sendo que estas alterações parecem ser sítio-específicas.
Apoio: CAPES, CNPq.
MODULAÇÃO DA VASOCONSTRIÇÃO INDUZIDA POR
ESTIMULAÇÃO A-ADRENÉRGICA PELO SISTEMA RENINA-
ANGIOTENSINA NA AORTA DE RATOS HIPERTENSOS TRG
MREN-2 E SPRAGUE-DAWLEY
SF Côrtes1 , DM Rover-Silva2 , BA Rezende2 , MJC Santos2 , VS Lemos2 1 2 Departamento de Farmacologia-ICB/UFMG-Belo Horizonte. Departamento de
Fisiologia e Biofísica-ICB/UFMG- Belo Horizonte
Objetivo. O objetivo deste trabalho foi estudar a contribuição do sistema renina-angiotensina vascular
na modulação da vasoconstrição induzida por estimulação dos receptores a-adrenérgicos na
aorta de rato.
Métodos. Foram utilizados anéis de aorta de ratos transgênicos que desenvolvem hipertensão arterial,
TGR mRen-2, e do seu controle ratos Sprague-Dawley (SD) (8–10 meses). Os vasos foram
mantidos em solução de Krebs-Henseleit (mmol/L): NaCl 110.8, KCl 5.9, NaHCO 3 25.0, MgSO 4
1.07, CaCl 2 2.29, NaH 2 PO 4 2.33 e glicose 11.51, a 37 °C, sob tensão de 1 g e aerados com carbogênio.
Os anéis foram conectados a hastes metálicas acopladas a transdutores isométricos. Curvas concentração-resposta
cumulativas forma construídas com a fenilefrina (10–9 a 3 x 10–5 mol/L) em vasos
contendo ou não endotélio funcional. Uma segunda curva foi construída 20 minutos após incubação
com diferentes drogas e comparada com a primeira.
Resultados. A resposta contrátil a fenilefrina nos ratos hipertensos foi significativamente menor
quando comparada aos ratos normotensos. O L-NAME (10 -6 mol/L) aumentou a resposta contrátil
da fenilefrina na aorta dos ratos mRen-2 e após o bloqueio da óxido nítrico sintase, a resposta da
fenilefrina tornou-se comparável nos dois modelos. Inibição da ECA pelo captopril (10- 5 mol/L)
potencializou a resposta contrátil da fenilefrina na aorta dos ratos mRen-2 e diminuiu a resposta
contrátil nos vasos dos ratos SD, sendo ambos os efeitos dependentes de endotélio funcional. O
efeito do captopril nos ratos hipertensos foi abolido quando os vasos foram pré-tratados com angiotensina
(1-7) (10- 9 mol/L). O bloqueio dos receptores AT 1 e AT 2 da angiotensina II, pelo CV11974
(10 -8 mol/L) e PD 123319 (10 -6 mol/L) respectivamente, diminuiu a resposta contrátil da fenilefrina
nos ratos SD, mas não afetou a resposta nos ratos trangênicos. Este efeito ocorreu apenas nos vaos
contendo endotélio funcional. O bloqueio dos receptores da angiotensina (1-7) e da bradicinina pelo
A-779 (10 -7 mol/L) e FR173657(10 -6 mol/L) respectivamente, aumentou a resposta contrátil da
fenilefrina nos ratos mRen-2, mas não nos ratos SD. Este efeito foi visto somente nos vasos contendo
endotélio funcional.
Conclusão. Pode-se concluir que existe na aorta de rato um sistema renina-angiotensina funcional
que modula a contração induzida por estimulação a-adrenérgica. Na aorta de ratos SD, a estimulação
de receptores endoteliais AT 1 e AT 2 potencializam a resposta contrátil da fenilefrina. Nos ratos
hipertensos mRen-2, a modulação da contração mediada por receptores AT 1 e AT 2 foi abolida. Uma
estimulação aumentada dos receptores endoteliais da bradicinina e da angiotensina (1-7), com conseqüente
liberação de NO, pode contribuir para a diminuição da resposta contrátil da fenilefrina nos
ratos hipertensos.
Apoio Financeiro. CNPq.