analytica 100

artigo 2
Imagem Ilustrativa
Autores:
Eduardo de Souza Matos 1 ,
Ronaldo Mohana-Borges *1 ,
Vitor Marcel Faça*2, Fábio César Gozzo *3 ,
Wagner Fontes4, Carlos André O. Ricart 4 ,
Fábio César Sousa Nogueira 5 ,
Mário Sérgio Palma §6 ,
Marcelo Valle de Sousa *4 .
Figura 1 - Cobertura de sequência das cadeias pesada e leve (representativa para o três lotes de Avastin®). Em azul, estão peptídeos sequenciados por espectrometria
de massa com “False Discovery Rate” (FDR) < 1 %. Em cinza, estão peptídeos sequenciados por espectrometria de massa com “False Discovery Rate” (FDR) > 1 %. Caixas
vermelhas correspondem a modificação (carbamidometilação) de cisteínas introduzidas durante o preparo da amostra para a separação das pontes dissulfeto. Caixas azuis
correspondem a oxidação de aminoácidos de ocorrência natural na amostra ou durante o preparo por exposição ao oxigênio atmosférico. Caixas amarelas correspondem a
deamidação de aminoácidos de ocorrência natural.
32
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Discussão
Com a finalidade de identificar
a sequência completa dos aminoácidos
correspondentes as sequências
F(ab)-12 LC e F(ab)-12 HC
do anticorpo monoclonal humanizado
bevacizumabe princípio ativo
do medicamento Avastin®, quatro
laboratórios brasileiros, reconhecidamente
proficientes na análise
de peptídeos e proteínas por EM,
desenvolveram estratégias independentes
para obter a sequência
de aminoácidos das cadeias leve e
pesada do bevacizumabe em três
diferentes lotes do produto comercial
Avastin®. Estas estratégias
compreendiam o uso de diferentes
espectrômetros de massas, métodos
de fracionamento das cadeias
do anticorpo (por exemplo, eletroforese
em gel de poliacrilamida com
SDS e agente redutor e cromatografia
líquida), precipitação de proteínas
com solvente orgânico, uso
de enzimas proteolíticas com distintos
sítios de clivagem, métodos
de fragmentação complementares
(CID, Collision Induced Dissociation;
HCD, Higher-energy Collisional
Dissociation; e ETD, Electron
Transfer Dissociation) e variadas
ferramentas bioinformáticas para
interpretação dos espectros de
fragmentação dos íons peptídicos e
inferência da sequência de aminoácidos
do anticorpo.
Todos os quatro laboratórios
alcançaram autonomamente
êxito na obtenção de 100% das
sequências F(ab)-12 LC e F(ab)-
12 HC do anticorpo monoclonal
humanizado bevacizumabe. Estes
resultados confirmam a sequência
publicada para os aminoácidos do
anticorpo (PRESTA et al., 1997),
em lotes diferentes e usando estratégias
variadas, além de demonstrar
a capacidade analítica
dos laboratórios brasileiros em
fornecer resultados robustos e de
qualidade mesmo em questões
complexas, como na caracterização
de biofármacos.
Conclusão
O Brasil dispõe de laboratórios
de proteômica muito bem
equipados e qualificados, para a
realização de análises multicomplexas
de química de proteínas,
aplicadas ao desenvolvimento e
controle de qualidade de anticorpos
monoclonais de uso terapêutico,
em apoio às indústrias farmacêuticas
interessadas.
Agradecimentos:
Nuno Manuel Domingues e Jaques
Ferreira de Souza, do Laboratório
de Bioquímica e Química
de Proteínas, Departamento de
Biologia Celular, Instituto de Ciências
Biológicas, Universidade de
Brasília, Brasília, DF.