生物制品分离制备技术实验指导 - 沈阳农业大学网络教学平台

(Dex) 体 系 ,PEG/ 盐 等 体 系 。分 离 某 一 生 物 大 分 子 , 两 相 系 统 的 选 择 原 则 , 必 须 有 利 于 目 的 产 物 的 萃 取 和 分 离 , 同时 又 要 兼 顾 到 聚 合 物 的 物 理 性 质 。 如 甲 基 纤 维 素 和 聚 乙 烯 醇 , 引 起 年 度 太 高 而 限 制 了 它 们的 应 用 。PEG 和 Dex 因 其 无 毒 性 和 良 好 的 可 调 性 而 得 到 广 泛 的 应 用 。糖 化 酶 亦 称 淀 粉 α-1,4 葡 萄 糖 苷 酶 。 这 类 酶 作 用 于 淀 粉 分 子 末 端 , 从 淀 粉 非 还 原 性 末端 顺 次 切 开 α-1,4 糖 苷 键 , 生 成 葡 萄 糖 。 它 们 也 能 作 用 于 支 链 淀 粉 的 α-1,6 键 , 但 速 度 较慢 , 因 此 分 解 产 物 全 部 为 葡 萄 糖 , 作 用 结 果 使 糖 的 还 原 能 力 迅 速 增 高 。 糖 化 酶 在 食 品 、 酿造 工 业 上 有 着 广 泛 用 途 , 是 酶 制 剂 工 业 上 一 个 重 要 品 种 。 国 内 生 产 糖 化 酶 的 菌 种 主 要 是 黑曲 霉 和 根 霉 。本 实 验 选 用 PEG400-(NH 4 ) 2 SO 4 为 双 水 相 系 统 , 从 发 酵 液 中 萃 取 糖 化 酶 。表 观 分 配 系 数 : 相 比 :VtR =Vb收 率 :YVtCtV C VCttbbRK1RK式 中 :C b 、C t 分 别 为 下 、 上 相 酶 浓 度 ( 活 性 );V b 、V t 分 别 为 下 相 、 上 相 的 体 积 。分 配 系 数 K 与 温 度 、 压 力 以 及 溶 质 和 溶 剂 的 性 质 有 关 , 与 溶 质 的 浓 度 无 关 。物 料 衡 算 : 加 入 的 原 液 总 酶 活 = 上 相 酶 活 × 上 相 体 积 + 下 相 酶 活 × 下 相 体 积CtK = Cb三 、 实 验 仪 器 与 药 品仪 器 : 天 平 、 恒 温 水 浴 、 离 心 机 、 液 相 混 合 器 ; 刻 度 试 管 、 吸 管 、 酸 式 滴 定 管 等 ;药 品 : 发 酵 液 、PEG400、(NH 4 ) 2 SO 4 、NaOH(C.P)、2% 可 溶 淀 粉 、0.15 M NaOH、1 M H 2 SO 4 ;四 、 实 验 步 骤1. PEG400-(NH 4 ) 2 SO 4 双 水 相 系 统 相 图 的 制 作水 性 两 相 的 形 成 条 件 和 定 量 关 系 常 用 相 图 表 示 , 由 上 、 下 相 中 PEG 和 (NH 4 ) 2 SO 4 的浓 度 可 在 PEG-(NH 4 ) 2 SO 4 浓 度 图 中 得 到 点 , 顺 次 连 接 这 些 点 得 到 一 曲 线 , 称 为 双 节 线 。 双节 线 下 方 为 一 相 区 , 上 方 为 两 相 区 。1.1 配 制 40% 的 硫 酸 铵 溶 液 ( 已 经 配 好 )。 在 具 塞 三 角 瓶 中 准 确 称 量 约 7 g 左 右 , 实 验中 量 取 7.19g 的 PEG400;6