生物制品分离制备技术实验指导 - 沈阳农业大学网络教学平台

还 原 相 对 百 分 率 为 50% 时 的 酶 量 作 为 一 个 酶 活 力 单 位 (U)。三 、 器 材 与 试 剂1、 器 材恒 温 水 浴 锅 、 冷 冻 高 速 离 心 机 、 可 见 分 光 光 度 计 、 研 钵 、 玻 棒 、 烧 杯 、 量 筒2、 材 料 和 试 剂1)、 新 鲜 蒜 瓣2)、0.05mol/L 磷 酸 缓 冲 液 (pH7.8)3)、 氯 仿 - 乙 醇 混 合 液 : 氯 仿 : 无 水 乙 醇 =3:54)、 丙 酮 : 用 前 需 预 冷 至 4-10℃5)、0.05mol/L 碳 酸 盐 缓 冲 液 (pH10.2)6)、0.1mol/LEDTA 溶 液7)、2mmol/L 肾 上 腺 素 溶 液四 、 实 验 步 骤1、 组 织 细 胞 破 碎 : 称 取 5g 大 蒜 蒜 瓣 , 置 于 研 钵 中 研 磨 。2、SOD 的 提 取 : 破 碎 后 的 组 织 中 加 入 2-3 倍 体 积 的 0.05mol/L 磷 酸 缓 冲 液 (pH7.8), 继续 研 磨 20min, 使 SOD 充 分 溶 解 到 缓 冲 液 中 , 然 后 在 5000rpm 下 离 心 15min, 取 上 清 液 。3、 除 杂 蛋 白 : 上 清 液 加 入 0.25 体 积 的 氯 仿 - 乙 醇 混 合 液 搅 拌 15min,5000rpm 离 心 15min,得 到 的 上 清 液 为 粗 酶 液 。4、SOD 的 沉 淀 分 离 : 粗 酶 液 中 加 入 等 体 积 的 冷 丙 酮 , 搅 拌 15min,5000rpm 离 心 15min,得 SOD 沉 淀 。 将 SOD 沉 淀 溶 于 0.05mol/L 磷 酸 缓 冲 液 (pH7.8) 中 , 于 55-60℃ 热 处 理 15min,得 到 SOD 酶 液 。5、SOD 活 力 测 定取 3 根 小 试 管 , 将 上 述 提 取 液 、 粗 酶 液 和 酶 液 分 别 取 样 , 按 下 表 分 别 加 进 各 种 试 剂和 样 品 液 , 测 定 各 自 的 SOD 活 力 。 单 位 (mL)试 剂 空 白 管 对 照 管 样 品 管碳 酸 缓 冲 液 5.0 5.0 5.0EDTA 溶 液 0.5 0.5 0.5蒸 馏 水 0.5 0.5 -样 品 液 - - 0.5混 合 均 匀 , 在 30℃ 水 浴 中 预 热 5min肾 上 腺 素 液 - 0.5 0.520