生物制品分离制备技术实验指导 - 沈阳农业大学网络教学平台

实 验 六大 豆 蛋 白 的 提 取 与 含 量 测 定一 、 实 验 目 的让 学 生 掌 握 大 豆 蛋 白 的 提 取 原 理 和 方 法 ; 学 习 计 算 粗 提 产 率 及 蛋 白 质 收 率 。掌 握 Folin 酚 法 测 定 蛋 白 浓 度 的 原 理 和 方 法 实 验 原 理 。二 、 实 验 原 理大 豆 中 含 有 丰 富 的 蛋 白 质 、 根 据 其 性 质 不 同 , 可 以 分 为 水 溶 蛋 白 、 盐 溶 蛋 白 、 醇 溶蛋 白 、 碱 溶 蛋 白 。 将 豆 粉 依 次 用 上 述 溶 剂 提 取 , 并 用 有 机 溶 剂 沉 淀 , 可 制 得 各 部 分 蛋 白 质的 干 粉 。 本 实 验 主 要 是 水 溶 提 取 大 豆 蛋 白 。 称 出 提 出 蛋 白 质 的 重 量 , 已 知 原 料 重 量 , 可 以求 出 蛋 白 质 的 收 率蛋 白 质 浓 度 可 以 从 它 们 的 物 理 化 学 性 质 , 如 比 重 、 紫 外 吸 收 , 折 射 率 等 测 定 而 得 知 ;或 用 化 学 方 法 , 如 定 氮 、 双 缩 脲 反 应 ,Folin 酚 试 剂 反 应 等 方 法 来 计 算 。 其 中 双 缩 脲 法 和Folin 酚 法 是 一 般 实 验 室 中 常 用 的 方 法 , 它 们 操 作 简 便 , 迅 速 , 不 需 要 复 杂 而 昂 贵 的 仪 器 。Folin 酚 法 灵 敏 度 高 , 比 双 缩 脲 法 灵 敏 100 倍 。Folin 酚 法 所 用 试 剂 是 由 两 部 分 组 成 , 试 剂 甲 相 当 于 双 缩 脲 试 剂 , 可 与 蛋 白 质 中 的 肽链 起 显 色 反 应 。 试 剂 乙 中 的 磷 钼 酸 和 磷 钨 酸 在 碱 性 条 件 下 不 稳 定 , 易 被 酚 类 还 原 而 呈 兰 色( 钼 兰 和 钨 兰 混 合 物 )由 于 蛋 白 质 中 含 有 带 酚 基 的 酷 氨 酸 还 原 呈 兰 色 , 溶 液 兰 色 的 深 浅 与 蛋 白 浓 度 有 较 好 的线 性 关 系 。 因 此 用 Folin 酚 法 测 定 蛋 白 质 含 量 , 灵 敏 度 较 高 。样 品 中 含 酚 类 化 合 物 及 柠 檬 酸 均 有 干 扰 作 用 , 如 果 样 品 酸 度 较 高 则 显 色 较 浅 , 要 提 高碳 酸 钠 一 氢 氧 化 钠 的 浓 度 。 此 法 也 可 测 定 溶 液 中 酪 氨 酸 的 色 氨 酸 的 浓 度 。Folin 酚 法 有 不 少 具 有 操 作 方 法 , 但 基 本 原 理 都 是 一 个 , 只 是 在 各 溶 液 的 浓 度 及 填 加量 上 , 保 温 的 温 度 及 保 温 时 间 上 有 所 不 同 而 已 , 本 实 验 所 介 绍 的 是 本 室 常 用 的 , 灵 敏 度 较高 的 操 作 方 法 。三 、 实 验 材 料 与 试 剂1、 实 验 材 料1) 豆 粉2) 本 实 验 所 提 取 大 豆 蛋 白 水 提 取 液 , 经 合 适 稀 释 至 可 测 定 范 围 。15