生物制品分离制备技术实验指导 - 沈阳农业大学网络教学平台

改 用 1% 氢 氧 化 钠 中 和 , 至 pH=4.7- 4.8(pH 计 测 定 )。 搅 拌 30min, 低 温 静 置 12h 以 上 。抽 滤 得 粗 品 。( 需 要 时 可 用 离 心 倾 析 法 )4、 提 纯 将 粗 品 溶 于 适 量 的 1% 盐 酸 溶 液 ( 可 用 150mL) 中 , 控 制 温 度 在 90-98℃, 加 入 相 当 于 粗 品 重 量 12%-13% 的 活 性 炭 , 搅 拌 并 脱 色 (2-3h) 至 滤 液 为 无 色 透 明 溶液 。 抽 滤 得 滤 液 , 用 30% 和 1% 的 NaOH 中 和 至 pH4.8 左 右 , 低 温 静 置 24h, 过 滤 收 集 得粗 品 Ⅱ( 如 果 效 果 不 错 , 可 以 作 为 成 品 使 用 )。5、 精 制 取 粗 品 Ⅱ 加 入 8 倍 质 量 的 6% 盐 酸 重 新 溶 解 , 控 制 温 度 在 50-60℃,加 入 活 性 炭 进 行 脱 色 , 保 温 搅 拌 脱 色 1h, 过 滤 后 用 12% 的 氨 水 在 搅 拌 条 件 下 进 行 中和 , 直 至 pH=4.8, 靜 置 5-6h, 即 析 出 精 品 , 用 蒸 馏 水 洗 至 无 氯 离 子 ,60℃ 干 燥 。6、 产 品 检 测 称 取 0.1000g 样 品 置 于 碘 量 瓶 中 , 加 3mL 1mo1/L 氢 氧 化 钠 及 3mL 水溶 解 , 再 加 30mL 水 及 50mL 0.05mol/L 溴 标 准 溶 液 和 10mL 盐 酸 , 立 即 密 封 , 振 摇 5min,放 置 10min, 在 冰 浴 中 冷 却 , 加 2g 碘 化 钾 振 摇 溶 解 , 暗 处 放 置 10min, 用 0.05mol/L 硫 代硫 酸 钠 标 淮 溶 液 滴 定 , 近 终 点 时 , 加 3mL 0.5% 淀 粉 指 示 液 , 继 续 滴 定 至 溶 液 蓝 色 消 失 ,同 时 作 空 白 试 验 。L— 胱 氨 酸 含 量 %(x) 按 下 式 计 算 :x=(V 1 —V 2 )×C×0.02403×100/G式 中V 1 —— 空 白 实 验 中 硫 代 硫 酸 钠 标 淮 溶 液 的 用 量 (d)V 2 —— 硫 代 硫 酸 钠 标 淮 溶 液 的 用 量 (d)C—— 硫 代 硫 酸 钠 标 淮 溶 液 的 浓 度 (mol/L)G—— 样 品 重 量 (g);0.02403—— 每 mmol 的 L— 胱 氨 酸 的 g 数 。五 、 注 意 事 项1、 水 解 终 点 检 查 : 取 反 应 液 2mL, 加 10% 氢 氧 化 钠 2mL, 然 后 滴 入 2% 硫 酸 铜 4-5滴 , 如 不 变 色 , 即 水 解 完 全 。2、pI 值 应 采 用 pH 计 测 量 。3、 反 应 中 温 度 应 较 好 的 控 制 。六 、 实 验 报 告1、 在 脱 色 过 程 中 , 使 用 的 活 性 炭 是 不 是 越 多 越 好 ? 为 什 么 ?2、 简 述 胱 氨 酸 提 取 的 原 理 和 技 术 关 键 。25