生物制品分离制备技术实验指导 - 沈阳农业大学网络教学平台

3800r/min 离 心 15min, 取 上 清 液 , 如 上 清 液 不 清 澈 再 经 过 滤 。2) 取 上 清 液 1 毫 升 稀 释 50 倍 留 做 蛋 白 测 定 。3) 其 余 清 液 加 入 等 体 积 在 冰 箱 中 预 冷 的 丙 酮 , 用 滴 管 少 量 多 次 慢 慢 滴 加 ( 搅 拌 )6mol/L和 1 mol/L HCL, 调 PH4.5~5.0,3800r/min, 离 心 15min, 收 集 沉 淀 物 , 反 复 用 丙 酮 搅 拌 洗涤 离 心 2 次 , 得 到 粉 末 状 蛋 白 质 干 粉 , 称 重 , 计 算 粗 产 率 。蛋 白 质 产 率 =蛋 白 质 产 物 重 量原 料 总 重 量×100%2、 标 准 曲 线 的 制 作 :标 准 酪 蛋 白 溶 液 : 用 0.03mol/L 的 磷 酸 缓 冲 液 溶 解 的 酪 蛋 白 , 浓 度 为 200μg/mL。 用 一支 0.5mL 移 液 管 分 别 取 上 述 标 准 酪 蛋 溶 液 0mL, 0.1mL,0.2mL,0.4mL,0.6mL,0.8mL,1.0mL 各 加 到 一 支 试 管 中 去 , 将 此 吸 管 用 0.03mol/LPH7.8 的 磷 酸 缓 冲 液 , 反 复 洗 净 , 再 用同 一 支 移 液 管 ( 防 止 未 经 标 定 吸 量 管 的 相 对 误 差 的 影 响 ) 取 上 述 缓 冲 液 将 每 支 试 管 中 的 溶液 补 加 至 1mL。 再 在 另 一 支 试 管 中 加 入 1mL 缓 冲 液 作 空 白 对 照 。 于 上 述 试 管 中 各 加 入1mLFolin 试 剂 甲 并 不 时 地 进 行 振 荡 ,10min 后 再 加 入 后 1in 试 剂 乙 的 应 用 液 4 毫 升 。 立 既 摇匀 放 入 55℃ 水 溶 中 保 湿 5min。 取 出 后 用 自 来 水 冷 却 1min。 于 波 长 650nm 进 行 比 色 测 定 各 管的 OD 值 , 以 蛋 白 质 的 浓 度 为 横 坐 标 ,OD 值 为 纵 坐 标 , 既 可 得 到 标 准 曲 线 。3、Folin- 酚 法 测 定 蛋 白 质 含 量 工 作 曲 线 的 制 作 :取 7 支 试 管 ( 干 燥 的 ) 按 下 表 顺 序 分 别 加 入 各 种 试 剂 并 进 行 反 应 和 测 定试 管 号 1 2 3 4 5 6 7蛋 白 质 标 准 液 (mL)00.10.20.40.60.81.0(mg)00.020.040.080.120.160.2PH7.8 的 buffer(mL) 1 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0Folin- 甲 试 剂 (mL) 1 1 1 1 1 1 1于 室 温 下 不 停 地 振 荡 10minFolin- 乙 应 用 液 (mL) 4 4 4 4 4 4 4A650 值立 即 摇 匀 , 在 55℃ 恒 温 水 浴 中 保 温 5min, 用 流 水 冷 却 1min 后 , 测 A6504、 样 品 测 定 :取 两 支 试 管 ( 平 行 ) 各 加 入 待 测 的 蛋 白 质 样 品 液 1mL( 不 加 buffer), 其 他 操 作 同 工作 曲 线 ( 可 取 两 支 试 管 编 号 8、9, 与 工 作 曲 线 同 时 进 行 反 应 和 比 色 测 定 );17