生物制品分离制备技术实验指导 - 沈阳农业大学网络教学平台

实 验 五香 菇 多 糖 的 分 离 提 取一 、 实 验 目 的让 学 生 了 解 香 菇 多 糖 的 理 化 性 质 及 提 取 工 艺 流 程 , 掌 握 真 空 浓 缩 技 术 。二 、 实 验 原 理香 菇 是 一 种 药 食 两 用 真 菌 , 具 有 提 高 免 疫 力 、 抗 癌 、 降 糖 等 多 种 生 理 功 能 。 水 溶 性多 糖 作 为 香 菇 主 要 活 性 成 分 之 一 , 主 要 以 β-1,3- 葡 聚 糖 的 形 式 , 分 子 量 从 几 万 到 几 十 万 不等 。 通 过 有 机 溶 剂 提 取 , 真 空 浓 缩 技 术 进 行 分 离 提 取 。三 、 实 验 材 料 与 试 剂原 料 : 干 香 菇 500g试 剂 : 氯 仿 、 正 丁 醇 、 医 用 纱 布 、 浓 硫 酸 、 重 蒸 酚 、 工 业 酒 精四 、 实 验 仪 器组 织 捣 碎 机 、 水 浴 锅 、 旋 转 蒸 发 器 、1cm 比 色 皿 、751 分 光 光 度 计 、 电 子 天 平 、 台 式 离 心机 、 试 管 、 量 筒 、 烧 杯 、 玻 璃 棒五 、 提 取 工 艺 流 程1. 1kg 干 香 菇 切 成 小 块 , 以 1:10( 重 量 比 ) 加 入 水 , 用 组 织 捣 碎 机 进 行 均 质 ;2. 取 200mL 均 质 液 放 入 1L 烧 杯 中 , 再 加 入 300mL 蒸 馏 水 , 加 热 至 沸 后 , 温 火 煮 沸 1 小 时 ,( 注 意 : 煮 沸 过 程 中 用 玻 璃 棒 不 断 搅 拌 , 以 免 烧 杯 底 部 发 生 糊 结 ; 并 间 歇 加 入 少 量 水 ,使 杯 内 液 体 体 积 保 持 在 500mL 左 右 ;3. 加 热 完 毕 后 , 将 杯 内 液 体 用 8 层 纱 布 过 滤 , 除 去 残 渣 , 上 清 液 转 入 另 一 烧 杯 中 ;4. 将 上 清 液 倒 入 圆 底 烧 瓶 中 , 在 旋 转 浓 缩 仪 上 进 行 浓 缩 , 浓 缩 条 件 为 -0.1MPa 、60℃,浓 缩 液 体 积 至 100 mL 左 右 停 止 ;5. 将 浓 缩 液 在 1×10000 g 离 心 10 min, 将 上 清 液 转 入 另 一 烧 杯 , 除 去 残 渣 ;6. 上 清 液 中 加 入 等 体 积 的 氯 仿 正 丁 醇 浓 液 ( 体 积 比 为 4:1), 搅 拌 5 min, 静 置 30 min;7. 将 混 合 液 体 在 1×5000g 下 离 心 20 min, 分 离 水 相 ;8. 在 水 相 中 加 入 终 浓 度 为 80% 的 酒 精 , 搅 拌 均 匀 , 静 置 20 min,1×5000g 下 离 心 10 min;9. 取 出 沉 淀 物 , 放 入 已 称 重 的 干 燥 表 面 皿 中 , 在 真 空 干 燥 箱 中 80℃ 下 真 空 干 燥 ;10. 干 燥 后 , 称 重 , 计 算 多 糖 的 产 率 ;11. 准 确 称 取 干 燥 后 多 糖 20 mg 于 500 mL 容 量 瓶 中 , 加 水 定 容 ;12. 取 定 容 液 2 mL 加 入 6% 苯 酚 1 mL, 混 匀 , 再 加 入 浓 硫 酸 5mL, 混 匀 , 放 置 20 min 后 , 于13