生物制品分离制备技术实验指导 - 沈阳农业大学网络教学平台

实 验 十 植 物 胡 萝 卜 素 的 分 离 与 含 量 测 定一 、 实 验 目 的( 柱 层 析 / 分 光 光 度 法 )1831 年 , 瓦 坎 罗 德 尔 (Wackenroder) 从 胡 萝 卜 中 分 离 到 了 胡 萝 卜 素 , 但 直 到 20 世纪 30 年 代 , 胡 萝 卜 素 的 化 学 结 构 才 得 以 确 定 。 植 物 中 的 胡 萝 卜 素 经 人 体 吸 收 后 , 可 以 在体 内 转 变 为 有 生 理 活 性 的 维 生 素 A, 其 中 起 主 要 作 用 的 是 β- 胡 萝 卜 素 。 胡 萝 卜 素 能 够 治 疗因 维 生 素 A 缺 乏 所 引 起 的 各 种 疾 病 。 此 外 , 胡 萝 卜 素 还 能 够 有 效 清 除 体 内 的 自 由 基 , 预防 和 修 复 细 胞 损 伤 , 抑 制 DNA 的 氧 化 , 预 防 癌 症 的 发 生 。β- 胡 萝 卜 素 还 可 以 作 为 禽 畜 饲料 添 加 剂 , 能 提 高 鸡 的 产 蛋 率 , 还 可 以 提 高 牛 的 生 殖 能 力 。β- 胡 萝 卜 素 具 有 优 良 的 着 色 性能 , 着 色 范 围 是 黄 色 、 橙 红 , 着 色 能 力 强 , 色 泽 稳 定 均 匀 , 能 与 K、Zn、Ca 等 元 素 并 存而 不 变 色 , 尤 其 适 合 添 加 在 儿 童 食 品 中 。 因 此 , 被 广 泛 作 为 食 品 、 饮 料 及 饲 料 的 添 加 剂 使用 。β- 胡 萝 卜 素 本 身 是 油 溶 性 的 , 非 常 适 合 油 性 产 品 或 蛋 白 质 类 产 品 的 开 发 , 如 人 造 奶 油 、胶 囊 、 鱼 浆 制 品 、 素 食 产 品 、 速 食 面 、 调 理 包 等 等 。 因 此 ,β- 胡 萝 卜 素 是 联 合 国 粮 农 组 织和 世 界 卫 生 组 织 食 品 添 加 剂 联 合 委 员 会 认 可 的 无 毒 、 有 营 养 的 食 品 添 加 剂 。 研 究 还 表 明 ,将 抗 氧 化 维 生 素 涂 抹 在 皮 肤 上 , 不 仅 能 防 止 紫 外 线 的 伤 害 , 还 能 促 进 对 已 被 伤 害 皮 肤 的 修复 , 使 皮 肤 保 持 弹 性 ,β- 胡 萝 卜 素 因 而 也 逐 渐 应 用 于 化 妆 品 等 新 兴 市 场 。通 过 本 实 验 的 学 习 , 掌 握 干 法 装 柱 操 作 技 术 和 液 相 色 谱 的 操 作 技 术 , 了 解 液 相 色 谱 的基 本 结 构 和 实 验 的 基 本 原 理 。二 、 实 验 原 理胡 萝 卜 素 常 和 叶 绿 素 、 叶 黄 素 等 共 同 存 在 于 植 物 中 , 这 些 色 素 都 能 被 有 机 溶 剂 提 取 出来 , 对 测 定 胡 萝 卜 素 有 干 扰 , 所 以 要 将 胡 萝 卜 素 与 其 它 色 素 分 开 。 目 前 广 泛 采 用 的 分 离 方法 是 柱 层 析 法 。 利 用 一 定 的 吸 附 剂 对 不 同 色 素 的 不 同 吸 附 能 力 , 将 样 品 提 取 液 中 有 生 理 价值 的 胡 萝 卜 素 从 其 它 色 素 中 分 离 出 来 , 在 适 当 的 条 件 下 , 各 种 色 素 被 吸 附 在 吸 附 柱 的 不 同位 置 上 , 形 成 色 谱 。 然 后 用 洗 脱 剂 将 所 需 要 的 胡 萝 卜 素 洗 脱 下 来 , 在 分 光 光 度 计 上 440nm波 长 处 测 定 其 浓 度 , 从 而 推 算 出 样 品 中 胡 萝 卜 素 的 含 量 。三 、 实 验 样 品 、 器 材 及 试 剂1、 样 品 : 紫 苏 叶2、 器 材 : 恒 温 水 浴 锅 , 有 机 溶 剂 冷 凝 回 流 装 置 , 分 液 漏 斗 125mL, 层 析 柱 200×10mm,抽 滤 装 置 125mL 抽 滤 瓶 , 试 管 , 分 光 光 度 计 。3、 试 剂 : 丙 酮 、 石 油 醚 60~90℃、 无 水 硫 酸 钠 , 吸 附 剂 : 氧 化 镁 ,900℃ 活 化 , 硅 藻 土 ,洗 脱 剂 : 丙 酮 : 石 油 醚 = 3:97。4、 胡 萝 卜 素 标 准 贮 备 液 , 溶 20mg 标 准 胡 萝 卜 素 于 3mL 氯 仿 中 , 然 后 以 石 油 醚 稀 至 50mL,26