Diplomarbeit - GSI

2 Methoden und Material
2.1 Verwendete Zelllinien und deren Kultur
2.1.1 Zelllinien
In der vorliegenden Arbeit wurden verschiedene Säugerzelllinien eingesetzt:
AG 1522 D
Hierbei handelt es sich um humane Vorhautfibroblasten von Coriell Cell Repositories aus
Camden, USA. Die Zellen wachsen als geschlossener Zellrasen und sind kontaktinhibiert.
Ihre Kultur erfolgte in EMEM Medium mit EBSS (BioWhittaker, Verviers, Belgien) mit
1 % L-alanyl-L-Glutamine und 15 % FCS sowie 100 U/ml Penicillin und 100 µg/ml
Streptomycin (alle Biochrom AG, Berlin, Deutschland). Für Experimente wurden die Fi-
broblasten entweder zwei Tage, für Immunfluoreszenz-Experimente oder zehn Tage zu-
vor, mit einer Zelldichte von 25000 Zellen/cm 2 oder 12500 Zellen/cm 2 , ausgesät.
ATM-defiziente Fibroblasten-Zelllinie AT1BR
Bei dieser Zelllinie handelt es sich um Fibroblasten von einem Ataxia telangiectasia (AT)-
Patienten. Diese Zellen sind Ataxia telangiectasia mutated (ATM)-defizient. Die homozy-
gote Mutation besteht aus einer Insertion von 9 Nukleotiden im ATM-Gen. Dadurch kann
kein funktionsfähiges ATM gebildet werden, da die Transkription nach 753 aa abgebro-
chen wird (Stankovic et al., 1998). Die Zellen stammen von der "European Collection of
Animal Cell Cultures" aus Großbritannien.
Die Kultivierung fand in HAM´s Medium (Biochrom AG, Berlin, Deutschland) mit
20 % FCS statt. Für Experimente wurden fünf Tage voher Zellen mit einer Dichte von
22500/cm 2 ausgesät.
ATM-defiziente Fibroblasten-Zelllinie AT5
Diese Zelllinie stammte ebenfalls von einem AT-Patienten. Die Zellen sind ATM-defizient
und zusätzlich spontan immortalisiert. Jedoch liegt eine Verunreinigung mit einer un-
bekannten Zellsorte vor (siehe Abbildung 3.1). Sie wurden freundlicherweise von Nuri
Gueven (Queensland Institute of Medical Research, Brisbane, Australien) zur Verfügung
gestellt.
Die Zellen wurden in RPMI Medium (Biochrom AG, Berlin, Deutschland) und 20 % FCS
kultiviert. Für Experimente wurden sie 5 Tage zuvor mit einer Dichte von 4000 Zellen/cm 2
ausgesät.
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