Diplomarbeit - GSI

3 Ergebnisse
3.2.1 Tip60 und ATMpS1981 an DNA-Doppelstrangbrüchen nach Inhibition der
ATM-Autophosphorylierung
Im Folgenden sollte geklärt werden, ob sich die Intensität des Fluoreszenzsignals der
Tip60-Foci nach Bestrahlung an DNA-Schäden in Abhängigkeit von aktiven ATM (ATMp-
S1981) ändert. Die Autophsophorylierung von ATM wurde durch den ATM Kinase Inhi-
bitor KU55933 inhibiert und die Rekrutierung von Tip60 und ATMpS1981, als Kontrolle
für die Wirkung des Inhibitors, an DNA-Schäden untersucht.
Humane Fibroblasten wurden ohne und mit ATM Inhibitor inkubiert (siehe 2.1.5), ei-
ne Stunde nach Bestrahlung mit 64 Ni-Ionen (Fluenz: 3,0*10 6 Teilchen/cm 2 ; LET: 3100
keV/µm) mit Paraformaldehyd fixiert und zum Einen gegen Tip60 und γH2AX und
zum Anderen gegen ATMpS1981 und 53BP1 immunzytochemisch gefärbt. Der Inhibi-
tor zeigte keinen Einfluss auf die Anzahl der erwarteten Treffer, die durch den jeweili-
gen Schadensmarker markiert wurden. Insgesamt wurden je 100 Foci, in ca. 40 Zellker-
nen, ausgewertet und die Mittelwerte der maximalen Fluoreszenzsignale der Tip60- und
ATMpS1981-Foci bestimmt.
In Abbildung 3.3 zeigt sich, dass die Inhibition der Autophosphorylierung von ATM we-
der einen Einfluss auf die Schadensrekrutierung von Tip60 noch auf die Schadensrekru-
tierung von ATMpS1981 hat. Die Tip60-Fluoreszenzsignale zeigen die gleiche Intensität
in den ohne und mit ATM Inhibitor-behandelten AG 1522 D Zellen (rote Histogramm-
Balken). Die Intensität der ATMpS1981 Fluoreszenzsignale der ohne und mit ATM Inhi-
bitor-behandelten AG 1522 D Zellen unterschied sich nur wenig, wobei die der Inhibitor-
behandelten Zellen sogar über denen der unbehandelten Zellen liegt (grüne Histogramm-
Balken). Die Funktion des ATM Inhibitors konnte während des Experiments nicht ne-
benher durch ein Röntgenversuch bestätigt werden, dabei wäre in Inhibitor-behandelten
Zellen kein Signal von ATMpS1981 an DNA-Schäden zu erwarten gewesen. Da der Ein-
satz des ATM Inhibitors KU55933 in einem vorangegangenen Experiment mit 12 C-Ionen
dazu führte, dass in bestrahlten AG 1522 D Zellen weniger ATMpS1981 Foci sichtbar
waren und diese eine geringere Fluoreszenzintensität als die unbehandelten Kontrollzel-
len aufwiesen (Tobias, 2008), muss davon ausgegangen werden, dass der Inhibitor in dem
hier durchgeführten Experiment nicht wirkte.
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