PLATELIA™ ASPERGILLUS Ag - Bio-Rad

ODER
Wasserbad:
Bei Benutzung eines siedenden Wasserbads: die Röhrchen 3 Minuten bei 100°C erhitzen (*). Die
Röhrchen dürfen nur dann in das Wasserbad gestellt werden, wenn die vorgeschriebene Temperatur
erreicht ist.
5. Die heißen Röhrchen vorsichtig aus dem Heizblock oder dem siedenden Wasserbad nehmen und in
die Zentrifuge stellen. Die Röhrchen bei 10.000 x g 10 Minuten lang zentrifugieren. Nur der Überstand
wird für den Nachweis des Galactomannan Antigens verwendet.
6. Mit dem Überstand wie folgt verfahren: idealerweise sofort testen, ansonsten den Überstand
abnehmen und bei 2-8°C bis zu 48 Std. vor der Testdurchführung aufbewahren. Soll nach Auswertung
der Ergebnisse erneut getestet werden, den Test nicht mit der behandelten Probe, sondern mit dem
Originalserum wiederholen.
(*) Die genaue Einhaltung der Vorschriften zu Dauer, Temperatur sowie Verwendung von
empfohlenem Material sind wesentliche Faktoren für den Erfolg des Tests.
Es reicht nicht, sich auf die auf dem Gerät angegebene Temperatur zu verlassen. Die Temperatur
sollte mit einem kalibrierten Thermometer, das in ein Reagenzröhrchen mit Mineralöl eingebracht
wird, überprüft werden. Die gemessene Temperatur innerhalb des Röhrchens muss im Heizblock
der vorgeschriebenen Temperatur von 120° C und im siedenden Wasserbad von 100° C
entsprechen.
EIA-Verfahren
Das vorgeschriebene Protokoll ist strikt einzuhalten.
Die GLP-Richtlinien sind einzuhalten.
1. Alle Reagenzien mindestens 30 Min. vor Gebrauch auf Raumtemperatur (+18-25°C) bringen.
2. Die Waschlösung ansetzen.
3. Probenverteilungsplan von Kontrollen und Serum- und BAL-Proben für die Mikrotiterplatte erstellen.
Dabei jeweils eine Vertiefung für die negative Kontrolle (R3), zwei Vertiefungen für das Cut-off-
Kontrollserum (R4) und eine Vertiefung für das positive Kontrollserum (R5) vorsehen.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A R5 S5 S13
B R4 S6
C R4 S7
D R3 S8
E S1 S9
F S2 S10
G S3 S11
H S4 S12
4. Den Rahmen und die benötigte Anzahl von Teststreifen (R1) aus der Schutzhülle nehmen. Nicht
verwendete Streifen mit dem Trockenmittel in den Beutel zurücklegen und diesen wieder fest
verschließen.
5. Den Inhalt der Konjugatflasche (R6) vor der Verwendung durch Umdrehen mischen. 50 µL Konjugat
(R6) in jede Vertiefung geben und anschliessend jeweils 50 µL der, wie oben beschriebenen,
vorbehandelten Serum-/BAL-Proben (Überstand). Serum-/BAL-Proben nicht vor dem Konjugat in
die Vertiefungen geben.
6. Die Mikrotiterplatte mit der Klebefolie abdecken. Diese fest auf der Platte andrücken, damit diese
dicht versiegelt und wasserdicht ist.
7. Die Mikrotiterplatte in einem Trockeninkubator für 90 ± 5 Minuten bei 37°C (± 1°C) inkubieren.
8. Die Klebefolie entfernen. Den Inhalt der Vertiefungen in einen Behälter für infektiöse Abfälle (mit
Natriumhypochlorit) absaugen. Die Mikrotiterplatte 5 Mal in einem Waschsysteme für
Mikrotiterplatten mit 800 µL verdünnter Waschlösung waschen. Nach dem letzten Waschvorgang
die Mikrotiterplatte umdrehen und vorsichtig auf Saugpapier ausklopfen, um die restliche Flüssigkeit
zu entfernen.
9. 200µl Chromogen TMB-Lösung (R9) schnell und lichtgeschützt in alle Vertiefungen geben.
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