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Substanz und der Laufstrecke der Fließmittelfront vom Startpunkt aus; er ist
für ein vorgegebenes chromatographisches System für eine Verbindung
charakteristisch. Verschiedene Aminosäuren unterscheiden sich in ihrem
Retentionsfaktor, wodurch die Analyse eines Aminosäuregemisches möglich
ist.
Versuch 4.1
(1) Geben Sie in eine Chromatographiekammer ein Gemisch aus n-
Butanol, Eisessig und Wasser im Volumenverhältnis 4:1:1, so dass die
Kammer ca. 1 cm hoch gefüllt ist, stellen Sie ein passendes Stück
Filterpapier hinzu und verschließen Sie die Kammer, um den Luftraum
mit dem Lösungsmittelgemisch zu sättigen. (2) Ziehen Sie vorsichtig
mit einem weichen Bleistift auf der DC-Platte 1 cm von der kürzeren
Kante entfernt einen zur Kante parallelen Strich als Startlinie und
unterteilen Sie den Strich in 1-cm-Abschnitte. Auf die Startlinie werden
die Lösungen der reinen Aminosäuren (Arginin, Alanin, Histidin, Lysin,
Methionin, Phenylalanin, Prolin, Valin) und das zu bestimmende gelöste
Gemisch mit 1 cm Abstand untereinander und auch zum Rand mit einer
feinen Kapillare aufgetragen. Tauchen Sie hierzu eine saubere Kapillare
in die entsprechende Lösung, worauf durch Kapillarkräfte eine
ausreichende Menge der Lösung in der Kapillare aufsteigt. Die Spitze
der Kapillare wird nun ruhig und senkrecht auf die vorgezeichnete Stelle
aufgesetzt und man läßt einen kleinen Teil der Lösung ausfließen. Der
gebildete Fleck wird kurz getrocknet und der gesamte Vorgang mehrere
Male wiederholt. Dabei wird darauf geachtet, daß der Durchmesser des
Flecks nicht größer als 2–3 mm wird. Stellen Sie nun die DC-Platte in
die Chromatographiekammer (die Sie wegen der Laufmittelsättigung
nicht unnötig offen stehen lassen!) und nehmen Sie sie erst dann
heraus, wenn sich die Fließmittelfront ca. 2 cm vom oberen Rand
entfernt befindet. Markieren Sie diesen Rand der Fließmittelfront und
lassen die Platte trocknen. Im Anschluss besprühen Sie die Platten
vorsichtig mit einer Ninhydrin-Lösung und lassen erneut trocknen.
Messen Sie nun den Abstand von der Mitte eines jeden Farbflecks zur
Startlinie und berechnen Sie den Rf-Wert, indem Sie den Abstand durch
den Abstand von der Startlinie bis zur Fließmittelfront teilen.
Welche Aminosäuren lagen in Ihrem Gemisch vor?
4.4 Übungsanalyse
Titration einer Ammoniumacetat-Lösung
Im folgenden Versuch wird mit Ammoniumacetat experimentiert. Lernziel
ist, die Parallelen zwischen diesem typische Ampholyt und einer Aminosäure
zu erkennen.
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