AUFSTEIGENDE DILATATIONEN - Universität zu Lübeck

MATERIAL UND METHODEN 25
2.2 Methoden
2.2.1 Narkose
Die Narkose erfolgte initial durch eine intraperitoneale Gabe von Medetomidin (1 mg / kg)
Midazolam (10 mg / kg) und Fentanyl (0.1 mg / kg). Nach Einleitung der Narkose erreichten
die Tiere nach ca. 3 Minuten das Toleranzstadium. Die Narkose wurde nach Präparation
durch eine kontinuierliche Applikation während des gesamten Versuchs aufrechterhalten.
Hierzu wurde die Narkose mit einem Perfusor (Secura FT, B.Braun, Melsungen) über einen
Katheter in der V. jugularis infundiert (Medetomidin 0.01 mg / h; Midazolam 0.1 mg / h;
Fentanyl 0.001 mg / h). Während des Versuchs wurde die Narkosetiefe durch mechanische
Stimulation (Zwicken oder Pusten) überprüft und die Dosis gegebenenfalls angepasst. Die
Versuche zur Magnetofektion (s.u.) erforderten eine Antagonisierung der Narkose nach Ende
der Transfektion. Dies erfolgte durch subkutane Applikation der Antagonisten Naloxon (1.2
mg / kg), Flumazenil (0.5 mg / kg) und Atipamezol (2.5 mg / kg). Die Tiere erwachten ca. 3
Minuten nach Applikation. Nach Beendigung des Versuchs wurden alle Mäuse durch Gabe
einer i.v. Bolusinjektion von 0.3 ml Pentobarbital (16 g / 100 ml) euthanasiert.
2.2.2 Versuchsvorbereitung und Präparation
2.2.2.1 Tracheotomie und Katheterisierung
Zu Beginn des Versuchs wurden die Mäuse im Hals- und Genitalbereich mit einem
handelsüblichen Langhaarschneider (Braun, Kronberg) rasiert. Anschließend wurden sie auf
eine Präparierplattform aus Styropor überführt und an den Vorderpfoten fixiert. Nach Setzen
eines Hautschnitts wurde die Trachea freipräpariert und mit zwei Baumwollfäden
aufgespannt. Nach Inzision der Trachea zwischen zwei Knorpelsegmenten wurde ein
Polyethylenschlauch (PE 50) als Tubus eingeführt und mit den beiden Baumwollfäden fixiert.
Der Tubus erleichterte hierbei die Spontanatmung der Maus. Nach Lagerung der Maus auf
das Mikroskop wurde die Maus mit einem Respirator (Hugo-Basile, Italien) beatmet. Die
mechanische Ventilation erfolgte mit einer Frequenz von 150 / min und einem Druck von 2
cm H 2 O.
Zur Kanülierung der Halsvene wurde über den für die Tracheotomie gesetzten Hautschnitt
die rechte V. jugularis freipräpariert und mit zwei Baumwollfäden gespannt. Nach Inzision
wurde das Gefäß mit einem Polyethylen Katheter (PE 10) kanüliert. Die korrekte Lage des
Katheters wurde durch Aspiration von Blut überprüft und die Narkose im weiteren
Versuchsverlauf über diesen Zugang infundiert.