Überlebensfähigkeit von kryokonservierten ... - Dragon IVF

ZUR, 1978; MAZUR, 1980). Das hat zur Folge, dass unter Verwendung von
Kryoprotektiva zum Beispiel bei Mäuseblastomeren erst ab -35°C bis -45°C ein
Gefrieren der Intrazellularflüssigkeit eintritt (LEIBO et al., 1977).
Als penetrierende Kryoprotektiva finden Stoffe wie Glycerol, Dimethylsulfoxid
(DMSO), Ethylenglycol (EG), Propandiol (PROH), Ethanol und andere Alkohole
Verwendung. DMSO wird nach neueren Erkenntnissen weniger stark verwendet
als noch vor einigen Jahren, da es eine ausgesprochen hohe Toxizität besitzt.
1983 berichteten RALL et al. von sehr guten Ergebnissen bei der Kryokonser-
vierung von Mäuseembryonen unter der Verwendung des Alkohols Methanol.
Auch andere höherwertige Alkohole wie Ethylenglycol (EG) und Propylenglycol
(PG) wurden in der Folgezeit auf ihre Embryonenverträglichkeit getestet. Es
zeigte sich sowohl eine gute kryoprotektive Wirkung auf die tierischen Kanin-
chen- und Mausembryonen als auch auf humane Embryonen (KASAI et al.,
1981; MIYAMOTO & ISHIBASHI, 1981, 1983a; NGUYEN et al., 1983; RALL &
POLGE, 1984; RENARD et al., 1984; RENARD & BABINET, 1984; TESTART
et al., 1985). In der Rinderzucht wird heutzutage bei der Kryokonservierung
sehr häufig Ethylenglycol eingesetzt, da dessen Toxizität so gering ist, dass es
möglich ist, kryokonservierte Embryonen auch ohne vorherige Ausverdünnung
zu übertragen.
2.4.1.1 Glycerol
Glycerol als Kryoprotektivum wurde erstmals 1949 von POLGE et al. als Ge-
frierschutzmittel für eine Kryokonservierung von Geflügelsperma erwähnt. Seit
diesem Zeitpunkt ist die Eigenschaft, Toxizität und Dosierung von Glycerol fort-
laufend erforscht worden.
Bereits 1971 vermerkte MERYMAN, dass Glycerol im Gegensatz zu DMSO im
Zellinneren kaum toxische Wirkung hat. BILTON untersuchte 1980 den Einfluss
von Glycerol und DMSO auf Rinderembryonen. Es wurden dabei allerdings kei-
ne signifikanten Unterschiede festgestellt. In weiteren Versuchen zu der optima-
len Konzentrationshöhe stellte sich heraus, dass Glycerol in den Konzentratio-
nen von 1,3 M bis 1,4 M DMSO mit einer Konzentration von 1,3 M bis 1,5 M bei
konventionellen Kryokonservierungsverfahren gegenüber im Vorteil ist. Zu die-
11