Überlebensfähigkeit von kryokonservierten ... - Dragon IVF

Deshalb kommen die Embryonen in einem ersten Schritt zunächst in eine nied-
riger konzentrierte Lösung zum Equilibrieren und anschließend in einem zwei-
ten Schritt für einen sehr kurzen Moment (wenige Sekunden bis etwa eine hal-
be Minute) bei geringerer Temperatur (4°C) in die eigentliche, hochkonzentrier-
te Vitrifikationslösung (FRIEDLER et al., 1988; NIEMANN & MEINECKE, 1993).
Saccharose wurde erstmals durch KASAI et al. 1990 als Vitrifikationslösungs-
Bestandteil verwendet. Sie benutzten eine Mischung aus 40% Ethylenglycol,
30% Ficoll und 0,5 M Saccharose. In seiner Eigenschaft als schnell penetrie-
rendes Kryoprotektivum gelangt EG bei der Equilibrierung rasch in ausreichen-
der Konzentration in die Zellen und auch beim Ausverdünnen ist EG in der La-
ge, die Zellen schnell wieder zu verlassen. Das bedeutet, dass die Toxizität
deutlich gesenkt werden kann, was wiederum dazuführt, dass höhere Überle-
bensraten erreicht werden.
In den Versuchen von KASAI et al. (1990) erfolgte die Embryonenequilibrierung
bei Raumtemperatur in einem Schritt von zwei bzw. fünf Minuten. Die Entwick-
lungsraten zu expandierten Blastocysten erreichten dabei Werte von bis zu 97
bzw. 98%.
2.6 Auftauen
Während zum Einfrier- und Gefriervorgang die drei Phasen Vorbereitungspha-
se, Seeding und Gefrierphase sowie im weiteren Sinne noch die beiden Phasen
Schädigungsprozesse und Lagerungsphase gehören, ist der Auftauvorgang
selber und die Gefrierschutzmittelausverdünnung dem Prozess des Auftauvor-
ganges zuzuordnen.
Der Auftaurate kommt für die spätere Vitalität der Embryonen eine ebenso gro-
ße Bedeutung zu wie der Kühlrate.
WHITTINGHAM et al. (1972) haben Mäuseembryonen mit -0,3°C/min auf -78°C
bis -269°C nach dem langsamen Verfahren eingefroren und tauten sie an-
schließend mit Raten von 4, 25, 215, 450°C/min wieder auf. Die besten Überle-
bensraten erzielten diejenigen Embryonen, die mit den Auftauraten von 4°C/min
bzw. 25°C/min aufgetaut worden waren.
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