Überlebensfähigkeit von kryokonservierten ... - Dragon IVF

3.7.1 Standartgefrierverfahren
Mittels des Standartgefrierverfahrens wurden die als gefriertauglich eingeordne-
ten Embryonen unter Verwendung des Kryoprotektivums (1,5 Mol EG und 0,25
Mol Saccharose in M2-Medium) eingefroren
Dazu wurde die Embryonen mit der Mundpipette unter dem Stereomikroskop
aus dem M2-Medium herausgenommen und in 10er-Gruppen in eine mit 350 µl
Gefrierschutzmedium gefüllte Center-well-Schale (60×15mm, Falcon, Heidel-
berg) umgesetzt.
3.7.1.1 Haake
Bei Verwendung des HAAKE-Einfrierautomaten verblieben die Embryonen für
20 Minuten bei Raumtemperatur (RT) auf der 37°C warmen Wärmeplatte (HT
200, Minitüb, Landshut) zum Equilibrieren im Kryoprotektivum. Kurz vor Ablauf
dieser Frist erfolgte das Aufziehen der equilibrierten Embryonen auf mit Ent-
wicklungsstadium, Spezies, Spültag und Stückzahl gekennzeichnete 0,25 ml
Kunststoffpailletten (Minitüb, Landshut) (Abb. 9). Dazu wurde zunächst eine
Mediumssäule von etwa 2cm, gefolgt von einer 1cm langen Luftsäule aufge-
nommen. Als nächstes kam das die Embryonen beinhaltende Kryoprotektivum,
wiederum gefolgt von einer 1cm langen Luftblase und einer abschließenden
Mediumssäule. Die letzte Kryoprotektivumssäule wurde solange aufgezogen,
bis am oberen Ende der Stopfen erreicht war. Die Luftblasen übernehmen da-
bei die Funktion eines Puffers und verhindern dadurch sowohl das Ansaugen
der Embryonen in den Stopfen, als auch ein versehentliches Kristallisations-
punktsetzen im Embryonen beinhaltenden Medium (Abb. 8).
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