Überlebensfähigkeit von kryokonservierten ... - Dragon IVF

6 Zusammenfassung
Das Ziel der vorliegenden Arbeit war es, die Einflüsse einer 60-minütigen Zwi-
schenlagerung auf die Entwicklungsrate von bei -18°C und -79°C auf zuvor in
flüssigem Stickstoff (-196°C) kryokonservierte Mäuseembryonen zu untersu-
chen.
Um bei den Spendertieren ein Erhöhung der zu gewinnenden Embryonen pro
Tier zu erreichen wurden insgesamt 132 Spendertiere mit zu Beginn der Versu-
che 7,5 IE eCG und 5,0 IE hCG und im weiteren Verlauf der Versuche mit 5,0
IE eCG und 5,0 IE hCG hormonell behandelt. Von diesen Tieren wurden nach
Spülung der Eileiter und Uterushörner insgesamt 1023 Eizellen und Embryonen
gewonnen. 410 Blastocysten und 167 Morulae wurden als gefriertauglich ange-
sehen und mittels des Standartgefrierverfahrens folgendermaßen kryokonser-
viert:
Im Anschluss an eine 20-minütige Equilibrierung im Kryoprotektivum (1,5 M EG
und 0,25 M Saccharose) bei Raumtemperatur, bei der bereits ein Aufziehen der
Embryonen auf die Kryopailletten stattfand, wurden die Pailletten in ein auf -6°C
gekühltes Alkoholbad (Gerät Haake) bzw. in die auf -6°C gekühlte Gefrierkam-
mer (Gerät Consartic) gegeben und fünf Minuten bei dieser Temperatur gehal-
ten. Nach Ablauf der fünf Minuten erfolgte das Seeding durch eine in LN2 ge-
kühlte Metallpinzelle. Nach dem Seeding erfolgte ein weiteres Halten der Tem-
peratur für fünf Minuten bei -6°C. Anschließend wurde die Temperatur mit einer
Kühlrate von 0,3°C/min bis auf -32°C abgesenkt und dort für noch einmal zehn
Minuten gehalten, bevor ein direktes Umsetzen in LN2 (Gerät Haake) bzw. die
Absenkung der Temperatur in der Gefrierkammer in freiem Fall auf -196°C (Ge-
rät Consartic). Bis zum Beginn der Versuche verblieben die Embryonen zur La-
gerung in LN2.
Für die Versuche wurden die Embryonen zu gleichen Gruppen in Kontrollgrup-
pe, Lagerung bei -18°C und Lagerung bei -79°C aufgeteilt.
Nach Lagerung und Auftauen bzw. bei der Kontrollgruppe nur nach dem Auf-
tauen wurden die Embryonen unter in vitro Bedingungen über die Zeitspanne
von 48 Stunden auf ihre Entwicklungsraten beobachtet.
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