Überlebensfähigkeit von kryokonservierten ... - Dragon IVF

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Abb. 13: Kultivierungsschale mit 10 Kultivierungs-Mediumdrops unter Öl Abb. 14: Inkubator C60, Labotect, Göttingen (Quelle: Labotect, Göttingen) Die Embryonen wurden jeweils im Abstand <strong>von</strong> 12 Stunden auf die Weiterent- wicklung kontrolliert. Dieses Schema ermöglichte eine gute Verfolgung der wei- teren Entwicklung. 3.11 Beurteilung <strong>von</strong> Embryonen 3.11.1 Morphologische Beurteilung In dieser Arbeit wurden Embryonen in der ersten Phase lediglich lichtmikrosko- pisch beurteilt, am Ende zusätzliche einer fluoreszenzmikroskopischen Unter- suchung mit FDA und Hoechst unterzogen. Die erste morphologische Beurtei- lung erfolgte gleich bei der Gewinnung der Embryonen. Für die Versuche zuge- 56
lassen wurden die Stadien Morula und Blastozyste. Als nicht zulässig galten jüngere Stadien, degenerierte Embryonen sowie unbefruchtete Eizellen. Die nächsten morphologischen Klassifizierungen der Embryonen erfolgten be- reits während der Rehydrierungsphase im Auftaumedium sowie während des Waschens. Die Weiterentwicklung der Embryonen in vitro bei 37°C, 6% CO2 und gesättig- ter LF im Brutschrank C60 (Labotect, Göttingen) wurden nach 12/24/36/48 Stunden unter dem Stereomikroskop (SZ 11, Olympus, Hamburg sowie Axio Observer. A1, ZeissMicroImaging GmbH, Göttingen) 50- bis 200-facher Ver- größerung kontrolliert. Die Morula- Embryonen wurden eingeteilt in: Grade I • „Sehr gut“: Embryonen mit guter Morphologie und Entwicklungsgeschwindig- keit. Die Blastomeren sind gleichmäßig in Form und Farbe und haben eine hervorragende Erscheinung mit intakter Zona pellucida. Grade II • „Gut“: Dem Entwicklungsstand entsprechende Embryonen mit geringfügigen Abweichungen und Unregelmäßigkeiten in der morphologischen Beschaffen- heit (z.B. einzelne ausgeschleuste Blastomeren, geringe Vesikelbildung, un- regelmäßige Zellformen, Farbveränderungen). Grade III • „Mäßig“: gewisser Grad an Veränderungen (z.B. Schäden an der Zona pellucida, mehrere ausgeschleuste Blastomere, geringe Vakuolenbildung in den Blastomeren). Grade IV • „Degeneriert und retardiert“: Embryonen mit starken Abweichungen in der morphologischen Beschaffenheit ((keine Rehydrierung, starke Zelllysis, zerfal- lene Blastomere mit Vakuolen sowie dunklen Punkten, verlorene Zona pellucida, kollabierte Embryonen). 57
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Aus dem Institut für Tierzucht und
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Inhaltsverzeichnis Abbildungsverzei
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4 Ergebnisse ......................
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Tabellenverzeichnis Tab. 1: Zusamme
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mm Millimeter Mo Morula mOsmol Auf
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Verwendete Geräte und Verbrauchsma
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1 Einleitung Die Kryokonservierung
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2 Literatur 2.1 Grundlagen der Kryo
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Seite 19 und 20: kann die Wasserstruktur dahingehend
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Danksagung Herrn Professor Dr. W. H
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