Überlebensfähigkeit von kryokonservierten ... - Dragon IVF

Zur Aufbewahrung der kryokonservierten Embryonen wurden in den Anfangs-
zeiten der Kryokonservierung Glasampullen verwendet, die im Laufe der Zeit
dann allerdings durch die heute gebräuchlichen Kunststoffpailletten ersetzt
wurden. BIELANSKY et al. (1985) stellten in ihren Untersuchungen fest, dass
es keine Unterschiede zwischen den Embryoüberlebensraten von Glasampul-
len und Kunststoffpailletten gab. Die Kunststoffpailletten erwiesen sich aber in
der Handhabung von Kryokonservierung, Lagerung und spätere Transfers als
vorteilhafter und haben sich daher durchgesetzt (MASSIP et al., 1982).
2.5.1 Standardgefrierverfahren
Das Hauptmerkmal des Standardgefrierverfahrens ist, dass Embryonen und
Kryoprotektiva nach festgelegten und kontrollierten Schemata auf Lagerungs-
temperatur heruntergekühlt werden. Auf diese Weise wird versucht, irreparable
Schäden durch unkontrollierte intrazelluläre Eiskristallbildung und Lösungsef-
fekte zu verhindern, die zum Zelltod und damit zum Absterben des Embryos
führen können. Deshalb werden spezielle, optimierte Kühlraten verwendet, die
auf die unterschiedlichen Spezies und Entwicklungsstadien sowie verwendeten
Kryoprotektiva genau zugeschnitten sind. Zur Steuerung der Abkühlraten wer-
den programmierbare Temperaturregler verwendet, an denen die jeweils benö-
tigten Kühlraten eingestellt werden können.
Beim Standardgefrierverfahren wird bei einer Temperatur von -6°C oder -7°C
manuell oder automatisch die Kristallisation der extrazellulären Medien ausge-
löst. Durch diesen als „Seeding“ bezeichneten Vorgang wird die Bildung kleiner
intrazellulärer Eiskristalle unterstützt und es soll durch diesen Vorgang ebenso
verhindert werden, dass es zu einer für den Embryo schädlichen Unterkühlung,
dem Supercooling, kommt. Häufig wird die Temperatur im Anschluss an das
Seeding noch für einige Minuten auf Seeding-Temperatur gehalten, bevor sie
mit definierter langsamer Kühlrate bis auf etwas -32°C weiter abgesenkt und
erneut für einige Minuten dort gehalten wird. Im letzten Schritt werden die Zel-
len durch schnelles Einfrieren, welches in der Regel durch direktes Umsetzen in
LN2 erfolgt, auf die Lagerungstemperatur von -196°C gebracht.
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