Überlebensfähigkeit von kryokonservierten ... - Dragon IVF

motischer Puffer bei der Entfernung penetrierender Gefrierschutzsubstanzen
verwendet, um ein zu starkes Anschwellen zu vermeiden (NIEMANN, 1982;
RENARD et al., 1982; LEIBO, 1984; MASSIP et al., 1987).
In Versuchen stellten SCHNEIDER & MAZUR (1984) fest, dass Mäuseembryo-
nen fähig sind, bei 23°C für 30 Minuten eine 2,7-fache Volumenzunahme zu
überstehen. Wird Saccharose als Puffer verwendet, können die Embryonen bis
auf 25% ihres ursprünglichen Volumens schrumpfen ohne das es zu Schäden
kommt. Nach abgeschlossener Equilibrierung und Umsetzung in zum Beispiel
ein Kulturmedium kehren die Embryonen zu ihrem normalen Volumen zurück
(SZELL & SHELTON, 1986; VOELKEL & HU, 1992a). Ein vollständig ablaufen-
der Schrumpfungs- und Reexpandierungszyklus ist neben der morphologischen
Beurteilung ein zusätzlicher Hinweis auf Unversehrtheit und Vitalität der Zellen
(BIELANSKY et al., 1986).
1989 untersuchten MAPLETOFT et al. die in vitro-Überlebensraten (ÜR) frisch
gespülter Mäuseembryonen in Abhängigkeit unterschiedlicher Saccharose-
Konzentrationen. Dazu wurden die Embryonen für 10 oder 30 Minuten bei 20°C
bzw. 35°C in den Saccharose-Lösungen equilibriert. Bei einer 0,5 M Saccharo-
se-Lösung schienen Zeit und Temperatur nur wenige Auswirkungen zu haben.
Bei 1,0 M Saccharose nahmen die in vitro-ÜR nach Verlängerung der Equi-
librierungsdauer und einer Temperaturerhöhung deutlich ab. Wurden die Mäu-
seembryonen einer 2,0 M Konzentration ausgesetzt, waren die ÜR sehr stark
verringert.
In Versuchen zur Verträglichkeit steigender Saccharose-Konzentrationen (0,0 M
bis 1,3 M) bei mit Glycerol kryokonservierten 8-Zell-Mauseembryonen, stellten
TAKEDA et al. 1987 im Anschluss an das Ausverdünnen bei steigenden Sac-
charose-Konzentrationen zunehmend Schäden an der Zona pellucida fest.
Durch die Entwicklung des sogenannten, 1983 von LEIBO beschriebenen One-
Step-Verfahrens, bei dem das Ausverdünnen bereits in der Gefrierpaillette statt-
findet, konnte der Arbeits- und Zeitaufwand bei Auftauen deutlich verringert
werden. Dazu werden außer dem Embryo und dem Kryoprotektivum auch zwei
Säulen mit Saccharose aufgezogen, die sich beim anschließenden Auftauen in
der Paillette vermischen und ein direktes Ausverdünnen ermöglichen. Für Rin-
derembryonen untersuchten HOOGENKAMP (1984) sowie SCHUBERT (1984)
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